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Plan du cours Objectifs PAES commun DHU Paris-Est I - La structure des acides nucléiques 1 - Molécules simples 2 - Les acides nucléiques II - Biosynthèse des macromolécules 3 - DNA Définitions 4 - La transcription 5 - La traduction 6 - La réplication 7 - La réparation III - Les événements génétiques 8 - Substitutions 9 - Mutations 10 - Insertions - délétions 11 - Transpositions IV - L’évolution 12 - Divergence 13 - Familles de gènes V - Le DNA au laboratoire 14 - Méthodes d’étude
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traduction HTML V2.7
V. Morice
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Partie V - Le DNA au laboratoire
Chapitre 14 - Méthodes d’étude | | |
14.1 - Extraction et purification du DNA
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| BM 15 |
- L’acide désoxyribonucléique est extrait à partir des lymphocytes d’une prise de sang sur EDTA (anticoagulant chélateur du Calcium).
- On sépare les lymphocytes des autres cellules sanguinbes par un gradient de densité, puis on les lave avant de les centrifuger en un culot de lymphocytes.
- On redissous ce culot dans un tampon et on pratique une extraction par le phénol, qui dissous les lipides et précipite les protéines en laissant les acides nucléiques en solution.
- On reprécipite enfin le DNA par l’alcool en présence de sel.
- Le DNA précipite en un nuage cotonneux blanchâtre (la « méduse ») qu’on recentrifuge et qu’on lave avant de redissoudre le DNA purifié dans de l’eau distillée.
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