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Biologie Moléculaire

Plan du cours

Objectifs PAES commun DHU Paris-Est

I - La structure des acides nucléiques

1 - Molécules simples

2 - Les acides nucléiques

II - Biosynthèse des macromolécules

3 - DNA Définitions

4 - La transcription

5 - La traduction

6 - La réplication

7 - La réparation

III - Les événements génétiques

8 - Substitutions

9 - Mutations

10 - Insertions - délétions

11 - Transpositions

IV - L’évolution

12 - Divergence

13 - Familles de gènes

V - Le DNA au laboratoire

14 - Méthodes d’étude


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traduction HTML V2.8
V. Morice


Partie V - Le DNA au laboratoire
Chapitre 14 - Méthodes d’étude

 

14.1 - Extraction et purification du DNA

 

Image BM_15_PICT.jpg
BM 15

  • L’acide désoxyribonucléique est extrait à partir des lymphocytes d’une prise de sang sur EDTA (anticoagulant chélateur du Calcium).
  • On sépare les lymphocytes des autres cellules sanguinbes par un gradient de densité, puis on les lave avant de les centrifuger en un culot de lymphocytes.
  • On redissous ce culot dans un tampon et on pratique une extraction par le phénol, qui dissous les lipides et précipite les protéines en laissant les acides nucléiques en solution.
  • On reprécipite enfin le DNA par l’alcool en présence de sel.
  • Le DNA précipite en un nuage cotonneux blanchâtre (la « méduse ») qu’on recentrifuge et qu’on lave avant de redissoudre le DNA purifié dans de l’eau distillée.

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14.1 - Extraction et purification du DNA
14.2 - Synthèse d’un cDNA
14.3 - Electrophorèse de DNA
14.4 - Hae III (enzyme de restriction)
14.5 - EcoR I
14.6 - Polymorphisme de restriction
14.7 - Polymorphisme Msp I de l’apoA-II
14.8 - Cartes de restriction
14.9 - Hybridation d’une sonde
14.10 - Calcul de la Tm
14.11 - Sonde hybridée
14.12 - Sonde spécifique d’allèle (ASO)
14.13 - Southern blot
14.14 - PCR
14.15 - Didésoxyadénosine triphosphate
14.16 - Réaction de séquence
14.17 - Séquençage d’ADN
14.18 - Gel de séquence