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Biologie Moléculaire

Plan du cours

Objectifs PAES commun DHU Paris-Est

I - La structure des acides nucléiques

1 - Molécules simples

2 - Les acides nucléiques

II - Biosynthèse des macromolécules

3 - DNA Définitions

4 - La transcription

5 - La traduction

6 - La réplication

7 - La réparation

III - Les événements génétiques

8 - Substitutions

9 - Mutations

10 - Insertions - délétions

11 - Transpositions

IV - L’évolution

12 - Divergence

13 - Familles de gènes

V - Le DNA au laboratoire

14 - Méthodes d’étude


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traduction HTML V2.8
V. Morice


Partie V - Le DNA au laboratoire
Chapitre 14 - Méthodes d’étude

 

14.9 - Hybridation d’une sonde

 

Image BM_17_PICT.jpg
BM 17

  • Un fragment de DNA double brin affecte normalement une structure secondaire en double hélice.
  • En élevant la température jusqu’à la Tm, on disjoint 50 % environ des liaisons hydrogène qui unissent les brins de DNA, ce qui dénature partiellement la double hélice.
  • Lorsque la température atteint 95°C. toutes les liaisons hydrogène sont rompues et la dénaturation du DNA est complète : DNA simple brin, qualifié de « dénaturé ». Au cours de la dénaturation, le coefficient d’extinction du DNA à 260 nm augmente (hyperchromicité).
  • En refroidissant brutalement (glace) les structures secondaires ne se reforment pas et le DNA reste dénaturé. Si on refroidit doucement, la double hélice se reforme progressivement. Un oligonucléotide (sonde) ajouté à ce moment peut s’hybrider avec un fragment complémentaire du DNA, dès que la température descend en-dessous de la Tm.
  • L’hybridation d’une sonde marquée (atomes radioactifs, radicaux fluorescents ou ligands spécifiques) sur un DNA dénaturé permet de marquer spécifiquement tous les fragments de ce DNA dont la séquence est complémentaire de la sonde.

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14.1 - Extraction et purification du DNA
14.2 - Synthèse d’un cDNA
14.3 - Electrophorèse de DNA
14.4 - Hae III (enzyme de restriction)
14.5 - EcoR I
14.6 - Polymorphisme de restriction
14.7 - Polymorphisme Msp I de l’apoA-II
14.8 - Cartes de restriction
14.9 - Hybridation d’une sonde
14.10 - Calcul de la Tm
14.11 - Sonde hybridée
14.12 - Sonde spécifique d’allèle (ASO)
14.13 - Southern blot
14.14 - PCR
14.15 - Didésoxyadénosine triphosphate
14.16 - Réaction de séquence
14.17 - Séquençage d’ADN
14.18 - Gel de séquence