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Biologie Moléculaire

Plan du cours

Objectifs PAES commun DHU Paris-Est

I - La structure des acides nucléiques

1 - Molécules simples

2 - Les acides nucléiques

II - Biosynthèse des macromolécules

3 - DNA Définitions

4 - La transcription

5 - La traduction

6 - La réplication

7 - La réparation

III - Les événements génétiques

8 - Substitutions

9 - Mutations

10 - Insertions - délétions

11 - Transpositions

IV - L’évolution

12 - Divergence

13 - Familles de gènes

V - Le DNA au laboratoire

14 - Méthodes d’étude


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traduction HTML V2.8
V. Morice


Partie V - Le DNA au laboratoire
Chapitre 14 - Méthodes d’étude

 

14.18 - Gel de séquence

 

Image BM_19_2_PICT.jpg
BM 19/2

  • En utilisant des amorces spécifiques, on fait synthétiser un brin complémentaire du DNA à lire, en présence d’une faible proportion de didésoxyribonucléotides marqués d’un radical fluorescent différent pour chaque base.
  • La DNA polymérase lorsqu’elle a incorporé un tel didésoxyribonucléotide ne peut plus continuer la synthèse faute d’extrémité 3’OH libre. Il se forme donc une multitude de brin complémentaires inachevés, chacun terminé par un didésoxyribonucléotide fluorescent caractéristique de la base de ce dernier nucléotide.
  • En séparant par électrophorèse ces fragments complémentaires on sépare dans le gel chacun des fragments, du plus petit au plus grand et on les détecte au passage par un faisceau laser qui excite la fluorescence et une cellule photoélectrique qui lit la lumière émise à chacune des longueurs d’onde des fluorescences caractéristiques des quatre bases.
  • L’ordinateur reçoit donc une série de mesure d’intensité lumineuses en forme de pics correspondant au passage de chacun des fragments : en interprétant la couleur de la fluorescence de chaque pic l’ordinateur écrit la séquence du DNA.

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14.1 - Extraction et purification du DNA
14.2 - Synthèse d’un cDNA
14.3 - Electrophorèse de DNA
14.4 - Hae III (enzyme de restriction)
14.5 - EcoR I
14.6 - Polymorphisme de restriction
14.7 - Polymorphisme Msp I de l’apoA-II
14.8 - Cartes de restriction
14.9 - Hybridation d’une sonde
14.10 - Calcul de la Tm
14.11 - Sonde hybridée
14.12 - Sonde spécifique d’allèle (ASO)
14.13 - Southern blot
14.14 - PCR
14.15 - Didésoxyadénosine triphosphate
14.16 - Réaction de séquence
14.17 - Séquençage d’ADN
14.18 - Gel de séquence