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Plan du cours Objectifs PAES commun DHU Paris-Est I - La structure des acides nucléiques 1 - Molécules simples 2 - Les acides nucléiques II - Biosynthèse des macromolécules 3 - DNA Définitions 4 - La transcription 5 - La traduction 6 - La réplication 7 - La réparation III - Les événements génétiques 8 - Substitutions 9 - Mutations 10 - Insertions - délétions 11 - Transpositions IV - L’évolution 12 - Divergence 13 - Familles de gènes V - Le DNA au laboratoire 14 - Méthodes d’étude
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traduction HTML V2.7
V. Morice
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Partie V - Le DNA au laboratoire
Chapitre 14 - Méthodes d’étude | | |
14.18 - Gel de séquence
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| BM 19/2 |
- En utilisant des amorces spécifiques, on fait synthétiser un brin complémentaire du DNA à lire, en présence d’une faible proportion de didésoxyribonucléotides marqués d’un radical fluorescent différent pour chaque base.
- La DNA polymérase lorsqu’elle a incorporé un tel didésoxyribonucléotide ne peut plus continuer la synthèse faute d’extrémité 3’OH libre. Il se forme donc une multitude de brin complémentaires inachevés, chacun terminé par un didésoxyribonucléotide fluorescent caractéristique de la base de ce dernier nucléotide.
- En séparant par électrophorèse ces fragments complémentaires on sépare dans le gel chacun des fragments, du plus petit au plus grand et on les détecte au passage par un faisceau laser qui excite la fluorescence et une cellule photoélectrique qui lit la lumière émise à chacune des longueurs d’onde des fluorescences caractéristiques des quatre bases.
- L’ordinateur reçoit donc une série de mesure d’intensité lumineuses en forme de pics correspondant au passage de chacun des fragments : en interprétant la couleur de la fluorescence de chaque pic l’ordinateur écrit la séquence du DNA.
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