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Biologie Moléculaire

Plan du cours

Objectifs PAES commun DHU Paris-Est

I - La structure des acides nucléiques

1 - Molécules simples

2 - Les acides nucléiques

II - Biosynthèse des macromolécules

3 - DNA Définitions

4 - La transcription

5 - La traduction

6 - La réplication

7 - La réparation

III - Les événements génétiques

8 - Substitutions

9 - Mutations

10 - Insertions - délétions

11 - Transpositions

IV - L’évolution

12 - Divergence

13 - Familles de gènes

V - Le DNA au laboratoire

14 - Méthodes d’étude


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traduction HTML V2.8
V. Morice


Partie V - Le DNA au laboratoire
Chapitre 14 - Méthodes d’étude

 

14.17 - Séquençage d’ADN

 

Image BM_19_1_PICT.jpg
BM 19/1

  • Pour connaître la séquence des DNA, on fait synthétiser un brin du DNA par une enzyme spécifique.
  • L’enzyme commence son travail à partir de l’extrémité 3’ d’une sonde hybridée qui sert d’amorce. Elle ajoute des nucléotides complémentaires de ceux du brin de DNA qu’elle copie.
  • On lui donne pour substrats des désoxynucléosides triphosphates normaux mélangés avec des didésoxynucléotides dont la fonction alcool secondaire en 3’ est réduite ce qui empêche la synthèse de se poursuivre au delà.
  • Les didésoxynucléotides incorporés en dernier sont marqués spécifiquement par des molécules fluorescentes (vert pour didésoxyA, bleu pour didésoxyC, jaune pour didésoxyG et rouge pour didésoxyT)
  • On sépare ensuite les fragments synthétisés dans un champ électrique (électrophorèse : les DNA sont des anions, ils vont donc vers le pôle +), en fonction de leur longueur (les plus petits vont plus vite).
  • On lit ensuite les taches successives, identifiées par leur couleur, ce qui révèle la séquence des fragments synthétisés.

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14.1 - Extraction et purification du DNA
14.2 - Synthèse d’un cDNA
14.3 - Electrophorèse de DNA
14.4 - Hae III (enzyme de restriction)
14.5 - EcoR I
14.6 - Polymorphisme de restriction
14.7 - Polymorphisme Msp I de l’apoA-II
14.8 - Cartes de restriction
14.9 - Hybridation d’une sonde
14.10 - Calcul de la Tm
14.11 - Sonde hybridée
14.12 - Sonde spécifique d’allèle (ASO)
14.13 - Southern blot
14.14 - PCR
14.15 - Didésoxyadénosine triphosphate
14.16 - Réaction de séquence
14.17 - Séquençage d’ADN
14.18 - Gel de séquence