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Plan du cours Objectifs I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques 1 - Phosphorylation - déphosphorylation 2 - Les polymérases 3 - Les ligases 4 - Les isomérases 5 - Les nucléases 6 - Autres enzymes II - Préparation des acides nucléiques 7 - Extraction et purification 8 - Synthèse des polynucléotides 9 - Caractérisation des acides nucléiques III - Caractérisation des événements génétiques 10 - Mutations 11 - Expression IV - Le génie génétique 12 - Mutagénèse 13 - Transposition - recombinaison 14 - Construction de vecteurs 15 - Transgénèse
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traduction HTML V2.7
V. Morice
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Partie II - Préparation des acides nucléiques | | |
Rappel des objectifs - Définir1 les termes suivants : oligonucléotide, sonde, ADN complémentaire.
- Décrire les gestes2 qui permettent de faire l’extraction et la purification d’ADN génomique à partir d’un prélèvement de sang.
- Expliquer le principe de l’extraction de l’ARN messager d’un tissu et de la réalisation pratique d’une banque de cDNA.
- Décrire les gestes qui permettent de faire l’amplification par PCR d’un fragment d’ADN dont on possède les amorces.
- Expliquer le principe de la synthèse d’un oligonucléotide au moyen d’un synthétiseur et de la technique des phosphoramidites.
- Décrire les gestes qui permettent de faire la synthèse d’une queue de nucléotides à l’extrémité d’un fragment d’ADN.
- Expliquer le principe du dosage des acides nucléiques. Faire le calcul de la quantité d’acides nucléiques à partir des données brutes fournies par un spectrophotomètre, en tenant compte des dilutions et du volume du milieu considéré.
- Expliquer le principe de l’hybridation d’une sonde. Faire le calcul de la Tm de cette sonde à partir de sa séquence et d’une formule de calcul. Etablir les conditions des phases d’un programme de PCR utilisant deux amorces de Tm voisines. Expliquer les étapes des techniques d’hybridation moléculaire qui auront été pratiquées ou expliquées en cours à titre d’exemples : hybridation sur filtre, hybridation in situ, hybridation en solution.
- Décrire le principe technique et les gestes qui permettent de faire le marquage d’une sonde par un atome de 32P ou par un nucléotide marqué.
- Expliquer le principe du séquençage d’un fragment d’ADN au moyen d’un séquenceur et de la technique des dye primers ou des dye terminators ; décrire et interprèter les résultats3 apparaissant sur l’écran de l’ordinateur après un séquençage automatique.
- Expliquer les principe de la recherche des éléments cis-régulateurs sur la séquence d’un promoteur (foot printing).
- Expliquer le principe des réactions permettant le dosage des ARN transcrits : PCR quantitative, protection à la Rnase.
1. Définir : préciser dans une phrase concise l’essence d’un objet ou les limites d’un concept en excluant toute notion étrangère et en comprenant toutes les variations possibles de l’objet ou du concept cerné.
2. Expliquer le principe, décrire ou mimer les gestes ou faire un schéma explicatif : préciser le motif de chacun de ces gestes. Etre capable de déceler une erreur qualitative dans la description d’un protocole.
Au niveau des travaux pratiques, les connaissances techniques théoriques étant acquises, on devra être capable de passer à la manipulation sans avoir à apprendre que la partie proprement manuelle.
3. Interpreter les résultats : à partir des données affichées par la machine, après la validation technique de la séquence, savoir décrire la structure de l’acide nucléique séquençé et reconnaître sur cette séquence des lésions moléculaires dont l’interprétation ne nécessite la levée d’aucune ambiguïté.
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