Partie II - Préparation des acides nucléiques
Chapitre 9 - Caractérisation des acides nucléiques

9.9 - Southern blot

BG 66

• Le Southern blot est une technique mise au point par Edward M. Southern en 1975 pour rechercher des fragments de DNA sur une électrophorèse en les hybridant avec une sonde complémentaire.
  1. Après avoir digéré le DNA par une enzyme de restriction, on obtient un mélange de très nombreux fragments de restriction. On soumet ces fragments à un électrophorèse pour les faire migrer dans un gel de haut en bas en fonction inverse de leur taille.
  2. On fait un montage pour faire passer les fragments grâce à une montée de tampon imprégnant le gel puis une membrane de nylon où le DNA va se fixer par des liaisons stables.
  3. La membrane de nylon avec le DNA fixé est alors mise à incuber dans un sac contenant une solution d’une sonde radioactive complémentaire du fragment de DNA qu’on recherche, à une température assez basse pour que l’hybride se forme mais assez élevée pour que cet hybride soit parfaitement complémentaire.
  4. On lave la membrane des molécules de la sonde qui ne sont pas fixées à leur DNA complémentaire, puis on la met en présence d’un film radiographique vierge dans une enceinte opaque pour que la sonde radioactive fixée sur les fragments de DNA complémentaires impressionne le film.
  5. On révèle le film où des taches noires (sur le négatif) correspondent aux emplacements où ont migré les fragments d’ADN complémentaires de la sonde. On compare les distances de migration avec des fragments de DNA radioactifs de tailles connues qui servent de marqueurs de taille.