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Biologie génique

Plan du cours

Objectifs

I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques

1 - Phosphorylation - déphosphorylation

2 - Les polymérases

3 - Les ligases

4 - Les isomérases

5 - Les nucléases

6 - Autres enzymes

II - Préparation des acides nucléiques

7 - Extraction et purification

8 - Synthèse des polynucléotides

9 - Caractérisation des acides nucléiques

III - Caractérisation des événements génétiques

10 - Mutations

11 - Expression

IV - Le génie génétique

12 - Mutagénèse

13 - Transposition - recombinaison

14 - Construction de vecteurs

15 - Transgénèse


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traduction HTML V2.8
V. Morice


Partie II - Préparation des acides nucléiques
Chapitre 9 - Caractérisation des acides nucléiques

 

9.4 - Dosage des acides nucléiques

 

Image BG_61_PICT.jpg
BG 61

  • Pour effectuer par spectrophotométrie directe le dosage d’une solution pure d’acides nucléiques, on utilise l’absorbance des rayons ultraviolets à 260 nm. On considère dans les calculs qu’une mole de nucléotides polycondensés représente 309 grammes. Il faut se placer autant que possible dans des conditions standard de mesure : cuve de 1 cm, solution 1 M (309 mg/mL), température ambiante, [Na+] 0,3 M, rapport A260/A280 ≥ 1,80.
  • Dans ces conditions le coefficient d’extinction de l’ADN double brin est de 6200 A260.M-1.cm-1, c’est à dire qu’une unité d’absorbance à 260 nm (A260) représente 50 μg/mL.
  • Au cours de la fusion de l’ADN, le coefficient d’extinction de la solution s’élève (hyperchromicité).
  • Dans ces conditions le coefficient d’extinction de l’ADN simple brin est de 8350 A260.M-1.cm-1, c’est à dire qu’une unité d’absorbance à 260 nm (A260) représente 37 μg/mL.
  • Dans ces conditions le coefficient d’extinction de l’ARN est de 7700 A260.M-1.cm-1, c’est à dire qu’une unité d’absorbance à 260 nm (A260) représente 40 μg/mL.

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9.1 - Principaux oligonucléotides
9.2 - Spectres UV des bases nucléiques
9.3 - Spectre UV des acides aminés
9.4 - Dosage des acides nucléiques
9.5 - Electrophorèse des acides nucléiques
9.6 - Sonde nucléique (définition)
9.7 - Hybridation d’une sonde
9.8 - Calcul de la Tm
9.9 - Southern blot
9.10 - Drépanocytose (anémie falciforme)
9.11 - Marquage : nick translation
9.12 - Marquage : random priming
9.13 - Marquage : terminal transferase
9.14 - Marquage : polynucléotide kinase
9.15 - Didésoxyadénosine triphosphate
9.16 - Réaction de séquence
9.17 - Séquençage de l’ADN
9.18 - Séquençage : dye primers
9.19 - Séquençage : dye terminators
9.20 - Gel de séquence
9.21 - Séquençage : image du gel
9.22 - Séquençage : analyse de l’image
9.23 - Séquençage : analyse de l’image
9.24 - Promoteur : foot printing
9.25 - Dosage d’ARN : PCR quantitative
9.26 - Dosage d’ARN : protection à la RNase