médecine
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Biologie génique

Plan du cours

Objectifs

I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques

1 - Phosphorylation - déphosphorylation

2 - Les polymérases

3 - Les ligases

4 - Les isomérases

5 - Les nucléases

6 - Autres enzymes

II - Préparation des acides nucléiques

7 - Extraction et purification

8 - Synthèse des polynucléotides

9 - Caractérisation des acides nucléiques

III - Caractérisation des événements génétiques

10 - Mutations

11 - Expression

IV - Le génie génétique

12 - Mutagénèse

13 - Transposition - recombinaison

14 - Construction de vecteurs

15 - Transgénèse


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traduction HTML V2.8
V. Morice


Partie II - Préparation des acides nucléiques
Chapitre 9 - Caractérisation des acides nucléiques

 

9.22 - Séquençage : analyse de l’image

 

Image BG_74_1_PICT.jpg
BG 74/1

  • La lecture des fluorescences permet de tracer quatre courbes de couleur sur un même graphe visibles en même temps et indiquant la densité optique de la lumière émise par le gel à chaque longueur d’onde spécifique d’un des quatre ddN*, en fonction du temps de migration qui est proportionnel à la longueur des fragments qui migrent. Les fragments successifs apparaissent comme autant de pics qui se succèdent, le suivant ayant toujours un nucléotide de plus que le précédent. L’ordinateur interprète alors chacun de ces pics en fonction de la longueur d’onde et donne le résultat sous forme d’une séquence qui s’écrit au dessus du graphe. Dans une autre fenètre de l’écran la séquence obtenue peut-être alignée avec les autres séquences du même gène lues sur le même gel ou déjà enregistrées comme séquences de référence.
  • Sur cet exemple, le pointeur de la souris désigne un moment de l’électrophorèse où sont passés successivement deux pics représentés en bleu, donc deux C sur la séquence. Le séquençage a été fait sur les deux brins de l’ADN et les séquences obtenues sont identiques. L’alignement de ces deux séquences avec une séquence de référence fait apparaître (position 410) que cette dernière est TCTCTT, alors que les séquences lues sur le gel sont TCTCCT. Il y a donc une substitution T→C.

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9.1 - Principaux oligonucléotides
9.2 - Spectres UV des bases nucléiques
9.3 - Spectre UV des acides aminés
9.4 - Dosage des acides nucléiques
9.5 - Electrophorèse des acides nucléiques
9.6 - Sonde nucléique (définition)
9.7 - Hybridation d’une sonde
9.8 - Calcul de la Tm
9.9 - Southern blot
9.10 - Drépanocytose (anémie falciforme)
9.11 - Marquage : nick translation
9.12 - Marquage : random priming
9.13 - Marquage : terminal transferase
9.14 - Marquage : polynucléotide kinase
9.15 - Didésoxyadénosine triphosphate
9.16 - Réaction de séquence
9.17 - Séquençage de l’ADN
9.18 - Séquençage : dye primers
9.19 - Séquençage : dye terminators
9.20 - Gel de séquence
9.21 - Séquençage : image du gel
9.22 - Séquençage : analyse de l’image
9.23 - Séquençage : analyse de l’image
9.24 - Promoteur : foot printing
9.25 - Dosage d’ARN : PCR quantitative
9.26 - Dosage d’ARN : protection à la RNase