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Biologie génique

Plan du cours

Objectifs

I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques

1 - Phosphorylation - déphosphorylation

2 - Les polymérases

3 - Les ligases

4 - Les isomérases

5 - Les nucléases

6 - Autres enzymes

II - Préparation des acides nucléiques

7 - Extraction et purification

8 - Synthèse des polynucléotides

9 - Caractérisation des acides nucléiques

III - Caractérisation des événements génétiques

10 - Mutations

11 - Expression

IV - Le génie génétique

12 - Mutagénèse

13 - Transposition - recombinaison

14 - Construction de vecteurs

15 - Transgénèse


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traduction HTML V2.8
V. Morice


Partie II - Préparation des acides nucléiques
Chapitre 9 - Caractérisation des acides nucléiques

 

9.11 - Marquage : nick translation

 

Image BG_68_PICT.jpg
BG 68

  • Le « déplacement de brèche » (nick translation) est une technique de marquage utilisant les propriétés de la DNA polymerase I (E. coli), pour obtenir des sondes radioactives.
  • L’ouverture d’une brèche dans la structure primaire d’un des deux brins d’un fragment d’ADN est obtenue par l’action de la désoxyribonucléase pancréatique.
  • La DNA polymérase synthétise un nouveau brin d’ADN à partir de l’extrémité 3’OH terminale d’un coté de la brèche ainsi créée. Simultanément l’activité 5’→3’ exonucléase de la DNA pol I hydrolyse les nucléotides du coté 5’-phosphate de la même brèche. Il en résulte un déplacement de la brèche le long de l’ADN avec un remplacement des nucléotides du brin coupé.
  • Si cette opération est réalisée en présence de nucléotides substrats fortement marqués, le marqueur sera incorporé dans le DNA synthétisé. Pour éviter la formation de structures en épingles à cheveux, la synthèse doit être maintenue très lente à une température basse : 16° C

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9.1 - Principaux oligonucléotides
9.2 - Spectres UV des bases nucléiques
9.3 - Spectre UV des acides aminés
9.4 - Dosage des acides nucléiques
9.5 - Electrophorèse des acides nucléiques
9.6 - Sonde nucléique (définition)
9.7 - Hybridation d’une sonde
9.8 - Calcul de la Tm
9.9 - Southern blot
9.10 - Drépanocytose (anémie falciforme)
9.11 - Marquage : nick translation
9.12 - Marquage : random priming
9.13 - Marquage : terminal transferase
9.14 - Marquage : polynucléotide kinase
9.15 - Didésoxyadénosine triphosphate
9.16 - Réaction de séquence
9.17 - Séquençage de l’ADN
9.18 - Séquençage : dye primers
9.19 - Séquençage : dye terminators
9.20 - Gel de séquence
9.21 - Séquençage : image du gel
9.22 - Séquençage : analyse de l’image
9.23 - Séquençage : analyse de l’image
9.24 - Promoteur : foot printing
9.25 - Dosage d’ARN : PCR quantitative
9.26 - Dosage d’ARN : protection à la RNase