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Biologie génique

Plan du cours

Objectifs

I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques

1 - Phosphorylation - déphosphorylation

2 - Les polymérases

3 - Les ligases

4 - Les isomérases

5 - Les nucléases

6 - Autres enzymes

II - Préparation des acides nucléiques

7 - Extraction et purification

8 - Synthèse des polynucléotides

9 - Caractérisation des acides nucléiques

III - Caractérisation des événements génétiques

10 - Mutations

11 - Expression

IV - Le génie génétique

12 - Mutagénèse

13 - Transposition - recombinaison

14 - Construction de vecteurs

15 - Transgénèse


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traduction HTML V2.8
V. Morice


Partie II - Préparation des acides nucléiques
Chapitre 8 - Synthèse des polynucléotides

 

8.1 - Polymerase Chain Reaction (PCR)

 

Image BG_53_PICT.jpg
BG 53

  • La PCR (polymerase chain reaction) permet d’amplifier spécifiquement une région de DNA double brin de quelques centaines de paires de bases. Ce DNA doit d’abord être séparé en simples brins (dénaturation à 95°C).
  • On ajoute au DNA de départ une large quantité d’amorces (oligonucléotides synthétiques complémentaires des deux extrémités de la région à amplifier) qui vont s’hybrider à 50-60°C environ avec la séquence complémentaire sur chacun des brins de DNA, et les quatre dNTP qui serviront de substrats.
  • On soumet le tout à l’activité d’une DNA polymérase (Taq polymerase) qui synthétise à 72°C un brin complémentaire à partir du 3’OH de l’amorce hybridée. On obtient quatre brins de DNA.
  • On recommence à dénaturer ces 4 brins, puis on les laisse s’hybrider avec les amorces (toujours en excès) et la polymérase entre en action pour aboutir à 8 brins de DNA.
  • On recommence à dénaturer ces 8 brins, puis on les laisse s’hybrider avec les amorces (toujours en excès) et la polymérase entre en action pour aboutir à 16 brins de DNA.
  • Et ainsi de suite 30 à 40 fois, ce qui aboutit à 34359738368 brins de DNA (34 milliards), ce qui représente une quantité suffisante pour étudier le fragment de DNA amplifié.

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8.1 - Polymerase Chain Reaction (PCR)
8.2 - PCR (I-1)
8.3 - PCR (I-2)
8.4 - PCR (I-3)
8.5 - PCR (II-1)
8.6 - PCR (II-2)
8.7 - PCR (II-3)
8.8 - PCR (III-1)
8.9 - PCR (III-2)
8.10 - PCR (III-3)
8.11 - Nested-PCR
8.12 - Phosphoramidites : dA-3’-support protégée
8.13 - Phosphoramidites : détritylation
8.14 - Phosphoramidites : addition d’un nucléotide
8.15 - Phosphoramidites : blocage des supports
8.16 - Phosphoramidites : oxydation
8.17 - Phosphoramidites : déprotection
8.18 - Synthèse d’un cDNA
8.19 - Sondes de cDNA amplifié
8.20 - Structures secondaires
8.21 - Synthèse des queues poly(dN)