médecine
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Biologie génique

Plan du cours

Objectifs

I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques

1 - Phosphorylation - déphosphorylation

2 - Les polymérases

3 - Les ligases

4 - Les isomérases

5 - Les nucléases

6 - Autres enzymes

II - Préparation des acides nucléiques

7 - Extraction et purification

8 - Synthèse des polynucléotides

9 - Caractérisation des acides nucléiques

III - Caractérisation des événements génétiques

10 - Mutations

11 - Expression

IV - Le génie génétique

12 - Mutagénèse

13 - Transposition - recombinaison

14 - Construction de vecteurs

15 - Transgénèse


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traduction HTML V2.8
V. Morice


Partie II - Préparation des acides nucléiques
Chapitre 8 - Synthèse des polynucléotides

 

8.8 - PCR (III-1)

 

Image BG_53_7_PICT.jpg
BG 53/7

  • Au cours de la précédente phase d’élongation chacun des brins d’ADN contenant la séquence du fragment d’intérêt a été répliqué une fois, la nombre de copies a donc encore doublé. A chaque cycle ce nombre doublera à nouveau et l’amplification se poursuit comme la suite des puissances de 2 : 22, 23, 24, 25, 26, 27,... à la fin du 35ème cycle, il y aura 235 copies soit plus de 34 milliards de copies !
  • Le cycle suivant commence par la phase de dénaturation pendant laquelle on dénature à nouveau l’ADN en le chauffant à 95° plusieurs minutes. A ce stade, il reste encore les deux ADN de départ, quelques ADN limités par une seule des séquences amorces et les séquences, de plus en plus nombreuses, limitées par les séquences des deux amorces.

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8.1 - Polymerase Chain Reaction (PCR)
8.2 - PCR (I-1)
8.3 - PCR (I-2)
8.4 - PCR (I-3)
8.5 - PCR (II-1)
8.6 - PCR (II-2)
8.7 - PCR (II-3)
8.8 - PCR (III-1)
8.9 - PCR (III-2)
8.10 - PCR (III-3)
8.11 - Nested-PCR
8.12 - Phosphoramidites : dA-3’-support protégée
8.13 - Phosphoramidites : détritylation
8.14 - Phosphoramidites : addition d’un nucléotide
8.15 - Phosphoramidites : blocage des supports
8.16 - Phosphoramidites : oxydation
8.17 - Phosphoramidites : déprotection
8.18 - Synthèse d’un cDNA
8.19 - Sondes de cDNA amplifié
8.20 - Structures secondaires
8.21 - Synthèse des queues poly(dN)