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Plan du cours Objectifs I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques 1 - Phosphorylation - déphosphorylation 2 - Les polymérases 3 - Les ligases 4 - Les isomérases 5 - Les nucléases 6 - Autres enzymes II - Préparation des acides nucléiques 7 - Extraction et purification 8 - Synthèse des polynucléotides 9 - Caractérisation des acides nucléiques III - Caractérisation des événements génétiques 10 - Mutations 11 - Expression IV - Le génie génétique 12 - Mutagénèse 13 - Transposition - recombinaison 14 - Construction de vecteurs 15 - Transgénèse
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traduction HTML V2.7
V. Morice
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Partie II - Préparation des acides nucléiques
Chapitre 8 - Synthèse des polynucléotides | | |
8.7 - PCR (II-3)
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| BG 53/6 |
- La Taq polymérase, thermorésistante, a été inactivée mais pas dénaturée durant la phase de dénaturation de l’ADN.
- En remontant la température à 72°C, l’enzyme recommence donc son activité. Elle catalyse la polycondensation des désoxyribonucléotides, qui se prolonge autant qu’il existe un brin complémentaire pour servir de modèle.
- Le nouveau brin d’ADN formé à partir de l’amorce amont (côté 5’) et se prolonge vers la droite (côté 3’). L’autre brin d’ADN formé à partir de l’amorce aval (côté 5’) et se prolonge vers la droite (côté 3’). Sur les brins d’ADN (en jaune) synthétisés à partir des amorces au cycle précédent, la synthèse sera limitée au côté 5’ de l’amorce opposée, faute de modèle pour poursuivre. Seul le fragment d’intérêt sera répliqué sur ces nouveaux fragments.
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