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Plan du cours Objectifs I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques 1 - Phosphorylation - déphosphorylation 2 - Les polymérases 3 - Les ligases 4 - Les isomérases 5 - Les nucléases 6 - Autres enzymes II - Préparation des acides nucléiques 7 - Extraction et purification 8 - Synthèse des polynucléotides 9 - Caractérisation des acides nucléiques III - Caractérisation des événements génétiques 10 - Mutations 11 - Expression IV - Le génie génétique 12 - Mutagénèse 13 - Transposition - recombinaison 14 - Construction de vecteurs 15 - Transgénèse
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traduction HTML V2.7
V. Morice
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Partie II - Préparation des acides nucléiques
Chapitre 8 - Synthèse des polynucléotides | | |
8.4 - PCR (I-3)
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| BG 53/3 |
- A 95°C durant la phase de dénaturation, puis à 50° C durant la phase d’hybridation, la Taq polymérase était inactive parce que trop éloignée de sa température optimale d’activité (75 à 80°C).
- En remontant la température à 72°C, l’enzyme commence son activité. Comme toutes les DNA polymérases elle nécessite un ADN double brin avec une extrémité 3’OH rentrante pour initier la polycondensation des désoxyribonucléotides, elle lit le brin modèle de 3’ vers 5’ et elle construit le nouveau brin de 5’ vers 3’ qui se prolonge autant qu’il existe un brin complémentaire pour servir de modèle.
- Le nouveau brin d’ADN est formé à partir de l’amorce amont (côté 5’) et se prolonge vers la droite (côté 3’). L’autre brin d’ADN est formé à partir de l’amorce aval (côté 5’) et se prolonge vers la gauche (côté 3’). La synthèse n’est limitée que par le temps d’incubation (environ 1000 nucléotides par minute).
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