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Biologie génique

Plan du cours

Objectifs

I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques

1 - Phosphorylation - déphosphorylation

2 - Les polymérases

3 - Les ligases

4 - Les isomérases

5 - Les nucléases

6 - Autres enzymes

II - Préparation des acides nucléiques

7 - Extraction et purification

8 - Synthèse des polynucléotides

9 - Caractérisation des acides nucléiques

III - Caractérisation des événements génétiques

10 - Mutations

11 - Expression

IV - Le génie génétique

12 - Mutagénèse

13 - Transposition - recombinaison

14 - Construction de vecteurs

15 - Transgénèse


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traduction HTML V2.8
V. Morice


Partie II - Préparation des acides nucléiques
Chapitre 8 - Synthèse des polynucléotides

 

8.4 - PCR (I-3)

 

Image BG_53_3_PICT.jpg
BG 53/3

  • A 95°C durant la phase de dénaturation, puis à 50° C durant la phase d’hybridation, la Taq polymérase était inactive parce que trop éloignée de sa température optimale d’activité (75 à 80°C).
  • En remontant la température à 72°C, l’enzyme commence son activité. Comme toutes les DNA polymérases elle nécessite un ADN double brin avec une extrémité 3’OH rentrante pour initier la polycondensation des désoxyribonucléotides, elle lit le brin modèle de 3’ vers 5’ et elle construit le nouveau brin de 5’ vers 3’ qui se prolonge autant qu’il existe un brin complémentaire pour servir de modèle.
  • Le nouveau brin d’ADN est formé à partir de l’amorce amont (côté 5’) et se prolonge vers la droite (côté 3’). L’autre brin d’ADN est formé à partir de l’amorce aval (côté 5’) et se prolonge vers la gauche (côté 3’). La synthèse n’est limitée que par le temps d’incubation (environ 1000 nucléotides par minute).

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8.1 - Polymerase Chain Reaction (PCR)
8.2 - PCR (I-1)
8.3 - PCR (I-2)
8.4 - PCR (I-3)
8.5 - PCR (II-1)
8.6 - PCR (II-2)
8.7 - PCR (II-3)
8.8 - PCR (III-1)
8.9 - PCR (III-2)
8.10 - PCR (III-3)
8.11 - Nested-PCR
8.12 - Phosphoramidites : dA-3’-support protégée
8.13 - Phosphoramidites : détritylation
8.14 - Phosphoramidites : addition d’un nucléotide
8.15 - Phosphoramidites : blocage des supports
8.16 - Phosphoramidites : oxydation
8.17 - Phosphoramidites : déprotection
8.18 - Synthèse d’un cDNA
8.19 - Sondes de cDNA amplifié
8.20 - Structures secondaires
8.21 - Synthèse des queues poly(dN)