médecine
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Biologie génique

Plan du cours

Objectifs

I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques

1 - Phosphorylation - déphosphorylation

2 - Les polymérases

3 - Les ligases

4 - Les isomérases

5 - Les nucléases

6 - Autres enzymes

II - Préparation des acides nucléiques

7 - Extraction et purification

8 - Synthèse des polynucléotides

9 - Caractérisation des acides nucléiques

III - Caractérisation des événements génétiques

10 - Mutations

11 - Expression

IV - Le génie génétique

12 - Mutagénèse

13 - Transposition - recombinaison

14 - Construction de vecteurs

15 - Transgénèse


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traduction HTML V2.8
V. Morice


Partie II - Préparation des acides nucléiques
Chapitre 8 - Synthèse des polynucléotides

 

8.3 - PCR (I-2)

 

Image BG_53_2_PICT.jpg
BG 53/2

  • Chacune des amorces amont et aval est complémentaire d’une séquence connue et on peut déterminer la Tm de leur hybridation : ici, 52°C pour la séquence amont et 54°C pour la séquence aval.
  • En refroidissant la température vers 50°C (un peu en-dessous des Tm des deux amorces) les fragments d’ADN dénaturé vont pouvoir s’hybrider avec des séquences complémentaires. La concentration des amorces étant beaucoup plus élevée que celle des brins d’ADN, chaque brin d’ADN s’hybridera avec une amorce qui lui est complémentaire.
  • Ainsi le brin du bas, orienté 5’→3’ de droite à gauche, s’hybridera avec l’amorce amont, orientée 5’→3’ de gauche à droite et le brin du haut, orienté 5’→3’ de gauche à droite, s’hybridera avec l’amorce aval, orientée 5’→3’ de droite à gauche.

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8.1 - Polymerase Chain Reaction (PCR)
8.2 - PCR (I-1)
8.3 - PCR (I-2)
8.4 - PCR (I-3)
8.5 - PCR (II-1)
8.6 - PCR (II-2)
8.7 - PCR (II-3)
8.8 - PCR (III-1)
8.9 - PCR (III-2)
8.10 - PCR (III-3)
8.11 - Nested-PCR
8.12 - Phosphoramidites : dA-3’-support protégée
8.13 - Phosphoramidites : détritylation
8.14 - Phosphoramidites : addition d’un nucléotide
8.15 - Phosphoramidites : blocage des supports
8.16 - Phosphoramidites : oxydation
8.17 - Phosphoramidites : déprotection
8.18 - Synthèse d’un cDNA
8.19 - Sondes de cDNA amplifié
8.20 - Structures secondaires
8.21 - Synthèse des queues poly(dN)