Partie II - Préparation des acides nucléiques
Chapitre 8 - Synthèse des polynucléotides

8.3 - PCR (I-2)

BG 53/2

• Chacune des amorces amont et aval est complémentaire d’une séquence connue et on peut déterminer la Tm de leur hybridation : ici, 52°C pour la séquence amont et 54°C pour la séquence aval.
• En refroidissant la température vers 50°C (un peu en-dessous des Tm des deux amorces) les fragments d’ADN dénaturé vont pouvoir s’hybrider avec des séquences complémentaires. La concentration des amorces étant beaucoup plus élevée que celle des brins d’ADN, chaque brin d’ADN s’hybridera avec une amorce qui lui est complémentaire.
• Ainsi le brin du bas, orienté 5’→3’ de droite à gauche, s’hybridera avec l’amorce amont, orientée 5’→3’ de gauche à droite et le brin du haut, orienté 5’→3’ de gauche à droite, s’hybridera avec l’amorce aval, orientée 5’→3’ de droite à gauche.