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Plan du cours Objectifs I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques 1 - Phosphorylation - déphosphorylation 2 - Les polymérases 3 - Les ligases 4 - Les isomérases 5 - Les nucléases 6 - Autres enzymes II - Préparation des acides nucléiques 7 - Extraction et purification 8 - Synthèse des polynucléotides 9 - Caractérisation des acides nucléiques III - Caractérisation des événements génétiques 10 - Mutations 11 - Expression IV - Le génie génétique 12 - Mutagénèse 13 - Transposition - recombinaison 14 - Construction de vecteurs 15 - Transgénèse
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traduction HTML V2.7
V. Morice
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Partie II - Préparation des acides nucléiques
Chapitre 8 - Synthèse des polynucléotides | | |
8.2 - PCR (I-1)
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| BG 53/1 |
- La PCR (polymerase chain reaction) est destinée à synthétiser un grand nombre de fragments d’ADN identiques à un fragment d’intérêt afin de pouvoir le caractériser. Ce fragment à multiplier est situé dans un ADN génomique ou dans un cDNA. Il est indispensable que soient connues les séquences aussi exactes que possible de deux petits oligonucléotides (20 à 30 nt) situés aux deux extrémités du fragment d’intérêt (côté 5’ ou amont ; côté 3’ ou aval).
- On synthétise ces oligonucléotides pour servir d’amorces à la réaction. L’amorce côté 5’ est identique à la séquence connue en amont. L’amorce côté 3’ est antiparallèle et complémentaire de la séquence connue en aval, c’est à dire identique à celle de l’autre brin à ce niveau.
- Pour commencer la réaction on dénature l’ADN en le chauffant à 95° plusieurs minutes, pour séparer les deux brins.
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