médecine
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Biologie génique

Plan du cours

Objectifs

I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques

1 - Phosphorylation - déphosphorylation

2 - Les polymérases

3 - Les ligases

4 - Les isomérases

5 - Les nucléases

6 - Autres enzymes

II - Préparation des acides nucléiques

7 - Extraction et purification

8 - Synthèse des polynucléotides

9 - Caractérisation des acides nucléiques

III - Caractérisation des événements génétiques

10 - Mutations

11 - Expression

IV - Le génie génétique

12 - Mutagénèse

13 - Transposition - recombinaison

14 - Construction de vecteurs

15 - Transgénèse


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traduction HTML V2.8
V. Morice


Partie II - Préparation des acides nucléiques
Chapitre 8 - Synthèse des polynucléotides

 

8.19 - Sondes de cDNA amplifié

 

Image BG_56_1_PICT.jpg
BG 56/1

  • On peut effectuer directement la synthèse biologique d’une sonde à partir d’un ARN messager, isolé dans la fraction des RNA-poly(A).
  • Dans une première étape, une amorce oligo d(T) est hybridée avec les séquences poly(A) des ARN messagers et la transcriptase réverse permet la synthèse d’un cDNA.
  • Dans la seconde étape, une amorce spécifique permet de synthétiser le second brin d’un cDNA correspondant à l’amorce choisie.
  • Enfin, la PCR permettra d’amplifier les deux brins d’ADN jusqu’à l’obtention d’une quantité suffisante de la sonde. Au cours de cette PCR on peut marquer la sonde avec un nucléotide radioactif ou biotinylé. Si la spécificité de l’amorce n’est pas suffisante, une seconde paire d’amorces spécifiques permettra d’obtenir la séquence recherchée (nested-PCR).

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8.1 - Polymerase Chain Reaction (PCR)
8.2 - PCR (I-1)
8.3 - PCR (I-2)
8.4 - PCR (I-3)
8.5 - PCR (II-1)
8.6 - PCR (II-2)
8.7 - PCR (II-3)
8.8 - PCR (III-1)
8.9 - PCR (III-2)
8.10 - PCR (III-3)
8.11 - Nested-PCR
8.12 - Phosphoramidites : dA-3’-support protégée
8.13 - Phosphoramidites : détritylation
8.14 - Phosphoramidites : addition d’un nucléotide
8.15 - Phosphoramidites : blocage des supports
8.16 - Phosphoramidites : oxydation
8.17 - Phosphoramidites : déprotection
8.18 - Synthèse d’un cDNA
8.19 - Sondes de cDNA amplifié
8.20 - Structures secondaires
8.21 - Synthèse des queues poly(dN)