médecine
     Page précédentePage suivanteSommaireVersion imprimable
   
 

Biologie génique

Plan du cours

Objectifs

I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques

1 - Phosphorylation - déphosphorylation

2 - Les polymérases

3 - Les ligases

4 - Les isomérases

5 - Les nucléases

6 - Autres enzymes

II - Préparation des acides nucléiques

7 - Extraction et purification

8 - Synthèse des polynucléotides

9 - Caractérisation des acides nucléiques

III - Caractérisation des événements génétiques

10 - Mutations

11 - Expression

IV - Le génie génétique

12 - Mutagénèse

13 - Transposition - recombinaison

14 - Construction de vecteurs

15 - Transgénèse


Tous droits de reproduction réservés aux auteurs


traduction HTML V2.8
V. Morice


Partie II - Préparation des acides nucléiques
Chapitre 8 - Synthèse des polynucléotides

 

8.18 - Synthèse d’un cDNA

 

Image BG_56_PICT.jpg
BG 56

  • La manipulation et l’étude des RNA est difficile à cause de leur grande sensibilité aux ribonucléases qui les détruisent.
  • Il est nécessaire de recopier la séquence en DNA pour qu’elle soit plus stable et qu’on puisse l’amplifier en fonction des besoins.
  • Le mRNA purifié (chromatographie d’affinité sur une colonne d’oligo-d(T)) est lié dans un premier temps avec des oligonucléotides poly(T) qui s’attachent à la queue poly(A).
  • A partir de l’extrémité 3’ de cette amorce poly(T) la transcriptase réverse, qui est une DNA polymérase, synthétise un brin de DNA complémentaire du messager de départ.
  • Une fois cette synthèse achevée on dégrade le RNA par une base forte ou par une ribonucléase spécifique.
  • Le brin de DNA fabriqué forme spontanément à son extrémité 3’ une boucle en épingle à cheveux en s’hybridant sur lui-même.
  • L’extrémité 3’ de cette boucle va servir de site de démarrage pour la DNA polymérase qui va synthétiser un brin de DNA complémentaire du premier.
  • Une nucléase spécifique du DNA simple brin supprimera la boucle de l’extrémité. Le cDNA double brin est prêt.
  • On peut ainsi constituer autant de cDNA qu’il existe de messagers dans une cellule : l’ensemble de ces cDNA forme une « banque de cDNA ».

     Page précédentePage suivanteSommaireVersion imprimable
   
 
8.1 - Polymerase Chain Reaction (PCR)
8.2 - PCR (I-1)
8.3 - PCR (I-2)
8.4 - PCR (I-3)
8.5 - PCR (II-1)
8.6 - PCR (II-2)
8.7 - PCR (II-3)
8.8 - PCR (III-1)
8.9 - PCR (III-2)
8.10 - PCR (III-3)
8.11 - Nested-PCR
8.12 - Phosphoramidites : dA-3’-support protégée
8.13 - Phosphoramidites : détritylation
8.14 - Phosphoramidites : addition d’un nucléotide
8.15 - Phosphoramidites : blocage des supports
8.16 - Phosphoramidites : oxydation
8.17 - Phosphoramidites : déprotection
8.18 - Synthèse d’un cDNA
8.19 - Sondes de cDNA amplifié
8.20 - Structures secondaires
8.21 - Synthèse des queues poly(dN)