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Biologie génique

Plan du cours

Objectifs

I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques

1 - Phosphorylation - déphosphorylation

2 - Les polymérases

3 - Les ligases

4 - Les isomérases

5 - Les nucléases

6 - Autres enzymes

II - Préparation des acides nucléiques

7 - Extraction et purification

8 - Synthèse des polynucléotides

9 - Caractérisation des acides nucléiques

III - Caractérisation des événements génétiques

10 - Mutations

11 - Expression

IV - Le génie génétique

12 - Mutagénèse

13 - Transposition - recombinaison

14 - Construction de vecteurs

15 - Transgénèse


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traduction HTML V2.8
V. Morice


Partie II - Préparation des acides nucléiques
Chapitre 8 - Synthèse des polynucléotides

 

8.17 - Phosphoramidites : déprotection

 

Image BG_55_6_PICT.jpg
BG 55/6

  • Lorsque le dernier cycle de synthèse a eu lieu, l’oligonucléotide est encore lié à la colonne par son extrémité 3’ et toutes ses fonctions réactives sont protégées.
  • Afin de donner au produit la structure d’un ADN normal, on déprotegera progressivement :
    • acide trichloracétique pour déprotéger la fonction 5’OH initiale,
    • thiophénol pour transformer les phosphotriesters en phosphodiesters en enlevant les groupes méthyl,
    • ammoniaque concentrée à 25 °C pour détacher l’oligonucléotide de son support et enlever une partie des radicaux acétyl de protection,
    • le reste des radicaux acétyl et les radicaux benzoyl sont détachés par l’ammoniaque concentrée à 55 °C.
  • Le produit final est habituellement purifié sur colonne ou dans un gel pour éliminer les produits de synthèses incomplètes.

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8.1 - Polymerase Chain Reaction (PCR)
8.2 - PCR (I-1)
8.3 - PCR (I-2)
8.4 - PCR (I-3)
8.5 - PCR (II-1)
8.6 - PCR (II-2)
8.7 - PCR (II-3)
8.8 - PCR (III-1)
8.9 - PCR (III-2)
8.10 - PCR (III-3)
8.11 - Nested-PCR
8.12 - Phosphoramidites : dA-3’-support protégée
8.13 - Phosphoramidites : détritylation
8.14 - Phosphoramidites : addition d’un nucléotide
8.15 - Phosphoramidites : blocage des supports
8.16 - Phosphoramidites : oxydation
8.17 - Phosphoramidites : déprotection
8.18 - Synthèse d’un cDNA
8.19 - Sondes de cDNA amplifié
8.20 - Structures secondaires
8.21 - Synthèse des queues poly(dN)