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Plan du cours Objectifs I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques 1 - Phosphorylation - déphosphorylation 2 - Les polymérases 3 - Les ligases 4 - Les isomérases 5 - Les nucléases 6 - Autres enzymes II - Préparation des acides nucléiques 7 - Extraction et purification 8 - Synthèse des polynucléotides 9 - Caractérisation des acides nucléiques III - Caractérisation des événements génétiques 10 - Mutations 11 - Expression IV - Le génie génétique 12 - Mutagénèse 13 - Transposition - recombinaison 14 - Construction de vecteurs 15 - Transgénèse
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traduction HTML V2.7
V. Morice
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Partie II - Préparation des acides nucléiques
Chapitre 8 - Synthèse des polynucléotides | | |
8.17 - Phosphoramidites : déprotection
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| BG 55/6 |
- Lorsque le dernier cycle de synthèse a eu lieu, l’oligonucléotide est encore lié à la colonne par son extrémité 3’ et toutes ses fonctions réactives sont protégées.
- Afin de donner au produit la structure d’un ADN normal, on déprotegera progressivement :
- acide trichloracétique pour déprotéger la fonction 5’OH initiale,
- thiophénol pour transformer les phosphotriesters en phosphodiesters en enlevant les groupes méthyl,
- ammoniaque concentrée à 25 °C pour détacher l’oligonucléotide de son support et enlever une partie des radicaux acétyl de protection,
- le reste des radicaux acétyl et les radicaux benzoyl sont détachés par l’ammoniaque concentrée à 55 °C.
- Le produit final est habituellement purifié sur colonne ou dans un gel pour éliminer les produits de synthèses incomplètes.
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