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Plan du cours Objectifs I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques 1 - Phosphorylation - déphosphorylation 2 - Les polymérases 3 - Les ligases 4 - Les isomérases 5 - Les nucléases 6 - Autres enzymes II - Préparation des acides nucléiques 7 - Extraction et purification 8 - Synthèse des polynucléotides 9 - Caractérisation des acides nucléiques III - Caractérisation des événements génétiques 10 - Mutations 11 - Expression IV - Le génie génétique 12 - Mutagénèse 13 - Transposition - recombinaison 14 - Construction de vecteurs 15 - Transgénèse
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traduction HTML V2.7
V. Morice
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Partie II - Préparation des acides nucléiques
Chapitre 8 - Synthèse des polynucléotides | | |
8.15 - Phosphoramidites : blocage des supports
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| BG 55/3 |
- Toutes les fonctions alcool primaires de la colonne peuvent réagir avec les fonctions acides libérées par le tétrazole. En principe, seules les fonctions 5’OH terminales du dernier nucléotide lié à la colonne ont été déprotégées et peuvent réagir de la sorte. Le rendement de cette réaction est presque total (> 99 %).
- Afin qu’aucune erreur de séquence ne soit possible par la suite, on passe de l’anhydride acétique sur la colonne pour bloquer à nouveau les fonctions alcool estérifiables qui par accident n’auraient pas été liées au phosphoramidite à l’étape précédente. Les oligonucléotides qui n’auraient pas réagi avec le nouveau nucléotide sont ainsi écartés définitivement de la suite du cycle de synthèse.
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