médecine
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Biologie génique

Plan du cours

Objectifs

I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques

1 - Phosphorylation - déphosphorylation

2 - Les polymérases

3 - Les ligases

4 - Les isomérases

5 - Les nucléases

6 - Autres enzymes

II - Préparation des acides nucléiques

7 - Extraction et purification

8 - Synthèse des polynucléotides

9 - Caractérisation des acides nucléiques

III - Caractérisation des événements génétiques

10 - Mutations

11 - Expression

IV - Le génie génétique

12 - Mutagénèse

13 - Transposition - recombinaison

14 - Construction de vecteurs

15 - Transgénèse


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traduction HTML V2.8
V. Morice


Partie II - Préparation des acides nucléiques
Chapitre 8 - Synthèse des polynucléotides

 

8.14 - Phosphoramidites : addition d’un nucléotide

 

Image BG_55_2_PICT.jpg
BG 55/2

  • L’addition d’un nouveau nucléotide est faite en chargeant la colonne d’une solution contenant le nouveau nucléotide avec des fonctions protégées :
    • par le DMTr pour la fonction 5’OH
    • par les réactifs (benzoate, isobutyrate) protégeant les fonctions des bases azotées
    • le phosphore lié à la fonction alcool en 3’ est un phosphoramidite dont la fonction amine est substituée par deux radicaux isopropyl et la fonction acide par un radical méthyl.
  • En présence de tétrazole, le nouveau nucléotide chargé voit sa liaison phosphoamide hydrolysée et la fonction acide ainsi apparue va estérifier la fonction alcool déprotégée du dernier nucléotide précédemment fixé à la colonne.
  • La liaison phosphodiester 3’→5’ est créée mais le phosphore est encore réduit (trivalent).

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8.1 - Polymerase Chain Reaction (PCR)
8.2 - PCR (I-1)
8.3 - PCR (I-2)
8.4 - PCR (I-3)
8.5 - PCR (II-1)
8.6 - PCR (II-2)
8.7 - PCR (II-3)
8.8 - PCR (III-1)
8.9 - PCR (III-2)
8.10 - PCR (III-3)
8.11 - Nested-PCR
8.12 - Phosphoramidites : dA-3’-support protégée
8.13 - Phosphoramidites : détritylation
8.14 - Phosphoramidites : addition d’un nucléotide
8.15 - Phosphoramidites : blocage des supports
8.16 - Phosphoramidites : oxydation
8.17 - Phosphoramidites : déprotection
8.18 - Synthèse d’un cDNA
8.19 - Sondes de cDNA amplifié
8.20 - Structures secondaires
8.21 - Synthèse des queues poly(dN)