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Plan du cours Objectifs I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques 1 - Phosphorylation - déphosphorylation 2 - Les polymérases 3 - Les ligases 4 - Les isomérases 5 - Les nucléases 6 - Autres enzymes II - Préparation des acides nucléiques 7 - Extraction et purification 8 - Synthèse des polynucléotides 9 - Caractérisation des acides nucléiques III - Caractérisation des événements génétiques 10 - Mutations 11 - Expression IV - Le génie génétique 12 - Mutagénèse 13 - Transposition - recombinaison 14 - Construction de vecteurs 15 - Transgénèse
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traduction HTML V2.7
V. Morice
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Partie II - Préparation des acides nucléiques
Chapitre 8 - Synthèse des polynucléotides | | |
8.14 - Phosphoramidites : addition d’un nucléotide
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| BG 55/2 |
- L’addition d’un nouveau nucléotide est faite en chargeant la colonne d’une solution contenant le nouveau nucléotide avec des fonctions protégées :
- par le DMTr pour la fonction 5’OH
- par les réactifs (benzoate, isobutyrate) protégeant les fonctions des bases azotées
- le phosphore lié à la fonction alcool en 3’ est un phosphoramidite dont la fonction amine est substituée par deux radicaux isopropyl et la fonction acide par un radical méthyl.
- En présence de tétrazole, le nouveau nucléotide chargé voit sa liaison phosphoamide hydrolysée et la fonction acide ainsi apparue va estérifier la fonction alcool déprotégée du dernier nucléotide précédemment fixé à la colonne.
- La liaison phosphodiester 3’→5’ est créée mais le phosphore est encore réduit (trivalent).
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