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Plan du cours Objectifs I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques 1 - Phosphorylation - déphosphorylation 2 - Les polymérases 3 - Les ligases 4 - Les isomérases 5 - Les nucléases 6 - Autres enzymes II - Préparation des acides nucléiques 7 - Extraction et purification 8 - Synthèse des polynucléotides 9 - Caractérisation des acides nucléiques III - Caractérisation des événements génétiques 10 - Mutations 11 - Expression IV - Le génie génétique 12 - Mutagénèse 13 - Transposition - recombinaison 14 - Construction de vecteurs 15 - Transgénèse
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traduction HTML V2.7
V. Morice
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Partie II - Préparation des acides nucléiques
Chapitre 8 - Synthèse des polynucléotides | | |
8.12 - Phosphoramidites : dA-3’-support protégée
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| BG 55 |
- La synthèse des oligonucléotides se fait sur la phase fixe d’une colonne parcourue par un flux de liquide contenant successivement les réactifs nécessaires.
- Contrairement à ce qui se passe dans la nature, la synthèse chimique des oligonucléotides se fait de 3’ vers 5’.
- Sur les particules solides de la colonne est fixé au départ un nucléotide qui sera le dernier de la séquence à synthétiser (extrémité 3’OH terminale). Ce nucléotide est lié par sa fonction alcool secondaire en 3’ à une fonction amine du support, par l’intermédiaire d’un acide succinique pour permettre la libre rotation de l’ensemble par rapport au support.
- Pour permettre de diriger la synthèse le nucléotide terminal a toutes ses fonctions bloquées par des radicaux empêchant les réactions prématurées ou parasites :
- radical diméthoxytrityl (DMTr), pour l’alcool primaire en 5’ du désoxyribose
- acide benzoïque, pour les fonctions amines de l’adénine ou de la cytosine
- acide isobutyrique pour la fonction amine de la guanine.
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