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Biologie génique

Plan du cours

Objectifs

I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques

1 - Phosphorylation - déphosphorylation

2 - Les polymérases

3 - Les ligases

4 - Les isomérases

5 - Les nucléases

6 - Autres enzymes

II - Préparation des acides nucléiques

7 - Extraction et purification

8 - Synthèse des polynucléotides

9 - Caractérisation des acides nucléiques

III - Caractérisation des événements génétiques

10 - Mutations

11 - Expression

IV - Le génie génétique

12 - Mutagénèse

13 - Transposition - recombinaison

14 - Construction de vecteurs

15 - Transgénèse


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traduction HTML V2.8
V. Morice


Partie II - Préparation des acides nucléiques
Chapitre 8 - Synthèse des polynucléotides

 

8.12 - Phosphoramidites : dA-3’-support protégée

 

Image BG_55_PICT.jpg
BG 55

  • La synthèse des oligonucléotides se fait sur la phase fixe d’une colonne parcourue par un flux de liquide contenant successivement les réactifs nécessaires.
  • Contrairement à ce qui se passe dans la nature, la synthèse chimique des oligonucléotides se fait de 3’ vers 5’.
  • Sur les particules solides de la colonne est fixé au départ un nucléotide qui sera le dernier de la séquence à synthétiser (extrémité 3’OH terminale). Ce nucléotide est lié par sa fonction alcool secondaire en 3’ à une fonction amine du support, par l’intermédiaire d’un acide succinique pour permettre la libre rotation de l’ensemble par rapport au support.
  • Pour permettre de diriger la synthèse le nucléotide terminal a toutes ses fonctions bloquées par des radicaux empêchant les réactions prématurées ou parasites :
    • radical diméthoxytrityl (DMTr), pour l’alcool primaire en 5’ du désoxyribose
    • acide benzoïque, pour les fonctions amines de l’adénine ou de la cytosine
    • acide isobutyrique pour la fonction amine de la guanine.

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8.1 - Polymerase Chain Reaction (PCR)
8.2 - PCR (I-1)
8.3 - PCR (I-2)
8.4 - PCR (I-3)
8.5 - PCR (II-1)
8.6 - PCR (II-2)
8.7 - PCR (II-3)
8.8 - PCR (III-1)
8.9 - PCR (III-2)
8.10 - PCR (III-3)
8.11 - Nested-PCR
8.12 - Phosphoramidites : dA-3’-support protégée
8.13 - Phosphoramidites : détritylation
8.14 - Phosphoramidites : addition d’un nucléotide
8.15 - Phosphoramidites : blocage des supports
8.16 - Phosphoramidites : oxydation
8.17 - Phosphoramidites : déprotection
8.18 - Synthèse d’un cDNA
8.19 - Sondes de cDNA amplifié
8.20 - Structures secondaires
8.21 - Synthèse des queues poly(dN)