Partie II - Préparation des acides nucléiques
Chapitre 8 - Synthèse des polynucléotides

8.11 - Nested-PCR

BG 54

• Les amorces spécifiques sont essentielles dans les techniques de PCR car elles seules vont déterminer le fragment à amplifier. Lorsqu’il existe des séquences homologues cette spécificité n’existe plus et la technique doit être modifiée pour mieux cibler le fragment à amplifier.
• On utilise deux couples d’amorces. Des amorces externes dont la spécificité peut permettre d’amplifier à la fois un petit nombre de séquences homologues et des amorces internes permettant d’amplifier spécifiquement une des séquences révélées par le couple d’amorces externes.
• Cette technique dite de nested-PCR (PCR nichée) se pratique comme la PCR avec le couple d’amorces externes pour dix cycles d’amplification. A cette étape on ajoute un excès d’une ou de deux amorces internes avant de prolonger l’amplification pour encore 25 cycles environ. Cette procédure permet le plus souvent d’obtenir l’amplification spécifique d’un seul fragment.