médecine
     Page précédentePage suivanteSommaireVersion imprimable
   
 

Biologie génique

Plan du cours

Objectifs

I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques

1 - Phosphorylation - déphosphorylation

2 - Les polymérases

3 - Les ligases

4 - Les isomérases

5 - Les nucléases

6 - Autres enzymes

II - Préparation des acides nucléiques

7 - Extraction et purification

8 - Synthèse des polynucléotides

9 - Caractérisation des acides nucléiques

III - Caractérisation des événements génétiques

10 - Mutations

11 - Expression

IV - Le génie génétique

12 - Mutagénèse

13 - Transposition - recombinaison

14 - Construction de vecteurs

15 - Transgénèse


Tous droits de reproduction réservés aux auteurs


traduction HTML V2.8
V. Morice


Partie II - Préparation des acides nucléiques
Chapitre 8 - Synthèse des polynucléotides

 

8.11 - Nested-PCR

 

Image BG_54_PICT.jpg
BG 54

  • Les amorces spécifiques sont essentielles dans les techniques de PCR car elles seules vont déterminer le fragment à amplifier. Lorsqu’il existe des séquences homologues cette spécificité n’existe plus et la technique doit être modifiée pour mieux cibler le fragment à amplifier.
  • On utilise deux couples d’amorces. Des amorces externes dont la spécificité peut permettre d’amplifier à la fois un petit nombre de séquences homologues et des amorces internes permettant d’amplifier spécifiquement une des séquences révélées par le couple d’amorces externes.
  • Cette technique dite de nested-PCR (PCR nichée) se pratique comme la PCR avec le couple d’amorces externes pour dix cycles d’amplification. A cette étape on ajoute un excès d’une ou de deux amorces internes avant de prolonger l’amplification pour encore 25 cycles environ. Cette procédure permet le plus souvent d’obtenir l’amplification spécifique d’un seul fragment.

     Page précédentePage suivanteSommaireVersion imprimable
   
 
8.1 - Polymerase Chain Reaction (PCR)
8.2 - PCR (I-1)
8.3 - PCR (I-2)
8.4 - PCR (I-3)
8.5 - PCR (II-1)
8.6 - PCR (II-2)
8.7 - PCR (II-3)
8.8 - PCR (III-1)
8.9 - PCR (III-2)
8.10 - PCR (III-3)
8.11 - Nested-PCR
8.12 - Phosphoramidites : dA-3’-support protégée
8.13 - Phosphoramidites : détritylation
8.14 - Phosphoramidites : addition d’un nucléotide
8.15 - Phosphoramidites : blocage des supports
8.16 - Phosphoramidites : oxydation
8.17 - Phosphoramidites : déprotection
8.18 - Synthèse d’un cDNA
8.19 - Sondes de cDNA amplifié
8.20 - Structures secondaires
8.21 - Synthèse des queues poly(dN)