médecine
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Biologie génique

Plan du cours

Objectifs

I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques

1 - Phosphorylation - déphosphorylation

2 - Les polymérases

3 - Les ligases

4 - Les isomérases

5 - Les nucléases

6 - Autres enzymes

II - Préparation des acides nucléiques

7 - Extraction et purification

8 - Synthèse des polynucléotides

9 - Caractérisation des acides nucléiques

III - Caractérisation des événements génétiques

10 - Mutations

11 - Expression

IV - Le génie génétique

12 - Mutagénèse

13 - Transposition - recombinaison

14 - Construction de vecteurs

15 - Transgénèse


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traduction HTML V2.8
V. Morice


Partie II - Préparation des acides nucléiques
Chapitre 7 - Extraction et purification

 

7.6 - Purification par l’éthanol

 

Image BG_51_PICT.jpg
BG 51

  • La purification d’une solution d’ADN se fait le plus souvent par précipitations répétées dans l’alcool.
  • Une solution d’ADN, portée à haute force ionique par addition de NaCl 3 M (1/10 du volume), est additionnée d’un large excès d’éthanol absolu à -20°C. Au bout de quelques minutes au maximum, on voit apparaître un précipité blanchâtre, translucide et filamenteux (la « méduse ») constitué de longs filaments d’ADN précipité.
  • On recueille ce précipité par centrifugation à 10000 g pendant un quart d’heure environ. Pour laver l’ADN on resuspend le précipité dans de l’éthanol à 75 % toujours à -20°C. puis on centrifuge à nouveau. Le culot de cette dernière centrifugation est égoutté, puis séché sous vide.
  • On peut conserver l’ADN à sec ou le redissoudre immédiatement soit dans de l’eau pure stérile, soit dans un tampon Tris-EDTA.

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7.1 - Purification des lymphocytes
7.2 - Homogénéisation des tissus, déprotéinisation
7.3 - Extraction de l’ADN
7.4 - Isolation de l’ARN
7.5 - Techniques de purification (tableau)
7.6 - Purification par l’éthanol
7.7 - Purification du RNA-poly(A)