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Biologie génique

Plan du cours

Objectifs

I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques

1 - Phosphorylation - déphosphorylation

2 - Les polymérases

3 - Les ligases

4 - Les isomérases

5 - Les nucléases

6 - Autres enzymes

II - Préparation des acides nucléiques

7 - Extraction et purification

8 - Synthèse des polynucléotides

9 - Caractérisation des acides nucléiques

III - Caractérisation des événements génétiques

10 - Mutations

11 - Expression

IV - Le génie génétique

12 - Mutagénèse

13 - Transposition - recombinaison

14 - Construction de vecteurs

15 - Transgénèse


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traduction HTML V2.8
V. Morice


Partie II - Préparation des acides nucléiques
Chapitre 7 - Extraction et purification

 

7.4 - Isolation de l’ARN

 

Image BG_49_PICT.jpg
BG 49

  • Pour extraire l’ARN d’un tissu ou d’une suspension de cellules, il faut impérativement inhiber toute trace de RNase.
  • L’homogénéisation dans le tube de Potter se fait dans un tampon Tris-EDTA en présence de thiocyanate de guanidinium 4 M et de SDS. Les débris cellulaires sont sédimentés en 10 min à 10 °C.
  • Le surnageant contenant les acides nucléiques est déposé sur un gradient de densité comprenant au fond du tube une solution très dense de CsCl 5,7 M surmontée d’une couche intermédiaire de CsCl 2,4 M. Ce gradient est ultracentrifugé durant 24 heures à 30000 tours/min à la température ambiante.
  • On peut alors recueillir un culot d’ARN de masses moléculaires élevées qui seront soumis à l’extraction par le phénol et le chloroforme.

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7.1 - Purification des lymphocytes
7.2 - Homogénéisation des tissus, déprotéinisation
7.3 - Extraction de l’ADN
7.4 - Isolation de l’ARN
7.5 - Techniques de purification (tableau)
7.6 - Purification par l’éthanol
7.7 - Purification du RNA-poly(A)