médecine
     Page précédentePage suivanteSommaireVersion imprimable
   
 

Biologie génique

Plan du cours

Objectifs

I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques

1 - Phosphorylation - déphosphorylation

2 - Les polymérases

3 - Les ligases

4 - Les isomérases

5 - Les nucléases

6 - Autres enzymes

II - Préparation des acides nucléiques

7 - Extraction et purification

8 - Synthèse des polynucléotides

9 - Caractérisation des acides nucléiques

III - Caractérisation des événements génétiques

10 - Mutations

11 - Expression

IV - Le génie génétique

12 - Mutagénèse

13 - Transposition - recombinaison

14 - Construction de vecteurs

15 - Transgénèse


Tous droits de reproduction réservés aux auteurs


traduction HTML V2.8
V. Morice


Partie II - Préparation des acides nucléiques
Chapitre 7 - Extraction et purification

 

7.3 - Extraction de l’ADN

 

Image BG_48_PICT.jpg
BG 48

  • Les solutions d’acides nucléiques et de protéines issues des préparations précédentes sont purifiées par addition de phénol saturé de tampon Tris-EDTA.
  • Après agitation douce du mélange, on sépare les phases par une centrifugation de 10 min sous 10000 g à la température de 4°C. A la sortie, on distingue une phase aqueuse surnageante contenant les acides nucléiques en solution, une phase organique au fond du tube : phénol + lipides et à l’interface un « gateau » de protéines précipitées.
  • On recueille la phase aqueuse avant de la laver par un mélange de chloroforme (CHCl3) et d’alcool isoamylique dans un rapport 24:1 (volume:volume). On recueille à nouveau une phase aqueuse contenant l’ADN en solution et une phase organique (24:1) contenant des restes de phénol, de protéines et de lipides.

     Page précédentePage suivanteSommaireVersion imprimable
   
 
7.1 - Purification des lymphocytes
7.2 - Homogénéisation des tissus, déprotéinisation
7.3 - Extraction de l’ADN
7.4 - Isolation de l’ARN
7.5 - Techniques de purification (tableau)
7.6 - Purification par l’éthanol
7.7 - Purification du RNA-poly(A)