médecine
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Biologie génique

Plan du cours

Objectifs

I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques

1 - Phosphorylation - déphosphorylation

2 - Les polymérases

3 - Les ligases

4 - Les isomérases

5 - Les nucléases

6 - Autres enzymes

II - Préparation des acides nucléiques

7 - Extraction et purification

8 - Synthèse des polynucléotides

9 - Caractérisation des acides nucléiques

III - Caractérisation des événements génétiques

10 - Mutations

11 - Expression

IV - Le génie génétique

12 - Mutagénèse

13 - Transposition - recombinaison

14 - Construction de vecteurs

15 - Transgénèse


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traduction HTML V2.8
V. Morice


Partie II - Préparation des acides nucléiques
Chapitre 7 - Extraction et purification

 

7.2 - Homogénéisation des tissus, déprotéinisation

 

Image BG_47_PICT.jpg
BG 47

  • L’extraction de l’ADN à partir des tissus se fait par broyage dans une presse à tissus, suivie d’une homogénéisation dans un tube de Potter.
  • L’homogénat qu’on obtient est un mélange de débris de membranes (microsomes), de nombreuses particules subcellulaires (noyaux, mitochondries) et de molécules en solution (cytoplasme).
  • On dissous cet homogénat avec une solution de lyse (tampon sans pression osmotique, faisant éclater les membranes fermées) en présence d’EDTA et de laurylsulfate de Sodium (SDS) qui inhibent les nucléases.
  • On incube enfin le milieu avec la protéinase K, pour détruire les protéines en présence du détergent (SDS), à la température ambiante et pendant toute la nuit.

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7.1 - Purification des lymphocytes
7.2 - Homogénéisation des tissus, déprotéinisation
7.3 - Extraction de l’ADN
7.4 - Isolation de l’ARN
7.5 - Techniques de purification (tableau)
7.6 - Purification par l’éthanol
7.7 - Purification du RNA-poly(A)