Site FMPMC
     Page précédentePage suivanteSommaireVersion imprimable
   
 

Biologie génique

Plan du cours

Objectifs

I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques

1 - Phosphorylation - déphosphorylation

2 - Les polymérases

3 - Les ligases

4 - Les isomérases

5 - Les nucléases

6 - Autres enzymes

II - Préparation des acides nucléiques

7 - Extraction et purification

8 - Synthèse des polynucléotides

9 - Caractérisation des acides nucléiques

III - Caractérisation des événements génétiques

10 - Mutations

11 - Expression

IV - Le génie génétique

12 - Mutagénèse

13 - Transposition - recombinaison

14 - Construction de vecteurs

15 - Transgénèse


Tous droits de reproduction réservés aux auteurs


traduction HTML V2.8
V. Morice


Partie I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques
Chapitre 6 - Autres enzymes

 

6.1 - β-galactosidase

 

Image BG_44_PICT.jpg
BG 44

  • La β-galactosidase est une enzyme d’Escherichia coli. Lorsque cette bactérie pousse sur un milieu riche en lactose, elle exprime la β-galactosidase qui est un des gènes de l’opéron lactose.
  • La β-galactosidase hydrolyse spécifiquement les liaisons osides dans lesquelles l’anomère β du galactose engage son carbone réducteur.
  • La β-galactosidase est utilisée comme gène « reporter » dans beaucoup de constructions de vecteurs. On introduit le promoteur de l’opéron lactose et le gène de la β-galactosidase dans un vecteur puis on transfecte des bactéries avec. Les bactéries utilisées sont dépourvues de l’opéron lactose (lac-).
  • En faisant pousser les bactéries transfectées en présence d’un inducteur de l’opéron lactose (IPTG = isopropyl-thio-galactoside) on induit la synthèse de l’enzyme dans les colonies. En faisant pousser ces colonies en présence d’un substrat artificiel (X-Gal, composé incolore) on permet l’hydrolyse de ce substrat par l’enzyme qui libère le produit X (5Br,4Cl-indol, coloré en bleu).
  • La présence de ce colorant donne la preuve de l’activité de la β-galactosidase, donc de son expression à partir du gène et par conséquent de la viabilité du vecteur transfecté dans les bactéries.

     Page précédentePage suivanteSommaireVersion imprimable
   
 
6.1 - β-galactosidase
6.2 - Protéinase K