Partie I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques
Chapitre 6 - Autres enzymes

6.1 - β-galactosidase

BG 44

• La β-galactosidase est une enzyme d’Escherichia coli. Lorsque cette bactérie pousse sur un milieu riche en lactose, elle exprime la β-galactosidase qui est un des gènes de l’opéron lactose.
• La β-galactosidase hydrolyse spécifiquement les liaisons osides dans lesquelles l’anomère β du galactose engage son carbone réducteur.
• La β-galactosidase est utilisée comme gène « reporter » dans beaucoup de constructions de vecteurs. On introduit le promoteur de l’opéron lactose et le gène de la β-galactosidase dans un vecteur puis on transfecte des bactéries avec. Les bactéries utilisées sont dépourvues de l’opéron lactose (lac-).
• En faisant pousser les bactéries transfectées en présence d’un inducteur de l’opéron lactose (IPTG = isopropyl-thio-galactoside) on induit la synthèse de l’enzyme dans les colonies. En faisant pousser ces colonies en présence d’un substrat artificiel (X-Gal, composé incolore) on permet l’hydrolyse de ce substrat par l’enzyme qui libère le produit X (5Br,4Cl-indol, coloré en bleu).
• La présence de ce colorant donne la preuve de l’activité de la β-galactosidase, donc de son expression à partir du gène et par conséquent de la viabilité du vecteur transfecté dans les bactéries.