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Biologie génique

Plan du cours

Objectifs

I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques

1 - Phosphorylation - déphosphorylation

2 - Les polymérases

3 - Les ligases

4 - Les isomérases

5 - Les nucléases

6 - Autres enzymes

II - Préparation des acides nucléiques

7 - Extraction et purification

8 - Synthèse des polynucléotides

9 - Caractérisation des acides nucléiques

III - Caractérisation des événements génétiques

10 - Mutations

11 - Expression

IV - Le génie génétique

12 - Mutagénèse

13 - Transposition - recombinaison

14 - Construction de vecteurs

15 - Transgénèse


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traduction HTML V2.8
V. Morice


Partie I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques
Chapitre 5 - Les nucléases

 

5.16 - Hga I

 

Image BG_30_PICT.jpg
BG 30

  • Hga I est une enzyme de restriction produite par Haemophilus gallinarum.
  • Le site de liaison à l’ADN est formé de cinq paires de nucléotides :
    5’ GACGC 3’
    3’ CTGCG 5’

  • Les sites de restriction ne sont quelquefois pas des palindromes, c’est à dire qu’ils sont différents sur les deux brins de l’ADN (mais antiparallèles sur l’autre brin). L’hydrolyse des liaisons phosphodiester se fait en dehors du site de liaison et le site hydrolysé n’est pas dans le site de restriction. Pour indiquer le site de coupure on ajoute à la séquence du site de restriction une fraction indiquant le nombre de nucléotides en aval de la séquence qui séparent l’extrémité 3’ de la séquence du site de coupure sur le brin de la séquence et sur le brin complémentaire : ici, 5 nucléotides en aval de la séquence sur le brin de la séquence et 10 nucléotides sur le brin complémentaire. Ici, il va rester des nucléotides non appariés : les fragments de restriction sont donc « à bouts collants ».
  • La méthylation de la deuxième cytosine du site d’hydrolyse inhibe la reconnaissance du site par Hga I. L’ADN de la bactérie ainsi méthylé n’est pas hydrolysé alors que l’ADN parasite qui n’est pas méthylé sera hydrolysé.

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5.1 - Fragment de restriction (définition)
5.2 - Système de restriction-modification
5.3 - Nomenclature des enzymes de restriction
5.4 - Restriction (réaction générale)
5.5 - Tampons d’incubation (restriction)
5.6 - EcoR I
5.7 - EcoR V
5.8 - Pvu II
5.9 - Hae III
5.10 - Pvu I
5.11 - Pst I
5.12 - Kpn I
5.13 - Alphabet dégénéré
5.14 - Ava II
5.15 - Hind II
5.16 - Hga I
5.17 - Mbo II
5.18 - Hha I
5.19 - Hpa I
5.20 - Digestion d’une séquence (Hae III)
5.21 - Digestion d’une séquence (Mbo II)
5.22 - Ribonucléase A
5.23 - Ribonucléase T1
5.24 - Ribonucléase H
5.25 - Désoxyribonucléase I
5.26 - Nucléase BAL 31
5.27 - Nucléase S1
5.28 - Nuclease de mung-bean
5.29 - Exonucléase de phage λ
5.30 - Exonucléase III