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Biologie génique

Plan du cours

Objectifs

I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques

1 - Phosphorylation - déphosphorylation

2 - Les polymérases

3 - Les ligases

4 - Les isomérases

5 - Les nucléases

6 - Autres enzymes

II - Préparation des acides nucléiques

7 - Extraction et purification

8 - Synthèse des polynucléotides

9 - Caractérisation des acides nucléiques

III - Caractérisation des événements génétiques

10 - Mutations

11 - Expression

IV - Le génie génétique

12 - Mutagénèse

13 - Transposition - recombinaison

14 - Construction de vecteurs

15 - Transgénèse


Tous droits de reproduction réservés aux auteurs


traduction HTML V2.8
V. Morice


Partie I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques
Chapitre 3 - Les ligases

 

3.2 - DNA ligase (E. Coli)

 

Image BG_16_PICT.jpg
BG 16

  • Les DNA ligases catalysent la liaison de l’extrémité 5’-phosphate terminale d’un brin d’ADN avec l’extrémité 3’-OH terminale d’un autre brin. La DNA ligase de E. coli ne lie les bouts francs de l’ADN qu’en présence de réactifs d’exclusion (polyéthylène glycol ou Ficoll), mais elle est toujours active pour souder les fragments d’ADN double brin à extrémités collantes, ou pour fermer une brèche dans un brin d’ADN dont la resynthèse est achevée.
  • La DNA ligase de E. coli utilise le NAD+ comme coenzyme donneur d’énergie selon la réaction :
    NAD+ → NMN+ + AMP

  • Elle n’a pas d’activité sur les RNA.
  • Les DNA ligases sont utilisées dans le clonage des fragments d’ADN et dans la construction des vecteurs.

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3.1 - DNA ligase (réaction)
3.2 - DNA ligase (E. Coli)
3.3 - DNA ligase (phage T4)
3.4 - RNA ligase (phage T4)