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Biologie génique

Plan du cours

Objectifs

I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques

1 - Phosphorylation - déphosphorylation

2 - Les polymérases

3 - Les ligases

4 - Les isomérases

5 - Les nucléases

6 - Autres enzymes

II - Préparation des acides nucléiques

7 - Extraction et purification

8 - Synthèse des polynucléotides

9 - Caractérisation des acides nucléiques

III - Caractérisation des événements génétiques

10 - Mutations

11 - Expression

IV - Le génie génétique

12 - Mutagénèse

13 - Transposition - recombinaison

14 - Construction de vecteurs

15 - Transgénèse


Tous droits de reproduction réservés aux auteurs


traduction HTML V2.8
V. Morice


Partie I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques
Chapitre 2 - Les polymérases

 

2.7 - T4 DNA polymérase

 

Image BG_08_PICT.jpg
BG 08

  • Dans une culture d’E. coli infectée par le bactériophage T4, on peut purifier la DNA polymérase de ce phage. Comme le fragment de Klenow elle est dépourvue d’activité 5’→3’ exonucléase, mais elle possède une activité 3’→5’ exonucléase 200 fois plus grande.
  • En l’absence de désoxynucléosides triphosphates, seule l’activité 3’→5’ exonucléase se manifeste, aboutissant à un DNA avec de longues extrémités 5’ sortantes. Lorsque les substrats sont ajoutés au milieu, la resynthèse se fait rapidement, permettant l’incorporation de nucléotides marqués. L’activité de la T4 polymérase est aussi rapide que celle de la DNA polymérase I.
  • La DNA polymérase du phage T4 est utilisée pour le marquage du DNA.

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2.1 - DNA polymérase (réaction)
2.2 - DNA polymérase (exonucléase 3’→5’)
2.3 - DNA polymérase (fonction d’édition)
2.4 - DNA-polymérases (tableau)
2.5 - DNA pol I (E. Coli)
2.6 - Fragment de Klenow
2.7 - T4 DNA polymérase
2.8 - Sequenase
2.9 - Taq polymérase
2.10 - Reverse transcriptase
2.11 - RNA polymérase II (réaction)
2.12 - RNA polymérases (phages)
2.13 - Poly(A) polymérase