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Plan du cours Objectifs I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques 1 - Phosphorylation - déphosphorylation 2 - Les polymérases 3 - Les ligases 4 - Les isomérases 5 - Les nucléases 6 - Autres enzymes II - Préparation des acides nucléiques 7 - Extraction et purification 8 - Synthèse des polynucléotides 9 - Caractérisation des acides nucléiques III - Caractérisation des événements génétiques 10 - Mutations 11 - Expression IV - Le génie génétique 12 - Mutagénèse 13 - Transposition - recombinaison 14 - Construction de vecteurs 15 - Transgénèse
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traduction HTML V2.7
V. Morice
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Partie I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques
Chapitre 2 - Les polymérases | | |
2.7 - T4 DNA polymérase
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| BG 08 |
- Dans une culture d’E. coli infectée par le bactériophage T4, on peut purifier la DNA polymérase de ce phage. Comme le fragment de Klenow elle est dépourvue d’activité 5’→3’ exonucléase, mais elle possède une activité 3’→5’ exonucléase 200 fois plus grande.
- En l’absence de désoxynucléosides triphosphates, seule l’activité 3’→5’ exonucléase se manifeste, aboutissant à un DNA avec de longues extrémités 5’ sortantes. Lorsque les substrats sont ajoutés au milieu, la resynthèse se fait rapidement, permettant l’incorporation de nucléotides marqués. L’activité de la T4 polymérase est aussi rapide que celle de la DNA polymérase I.
- La DNA polymérase du phage T4 est utilisée pour le marquage du DNA.
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