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Plan du cours Objectifs I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques 1 - Phosphorylation - déphosphorylation 2 - Les polymérases 3 - Les ligases 4 - Les isomérases 5 - Les nucléases 6 - Autres enzymes II - Préparation des acides nucléiques 7 - Extraction et purification 8 - Synthèse des polynucléotides 9 - Caractérisation des acides nucléiques III - Caractérisation des événements génétiques 10 - Mutations 11 - Expression IV - Le génie génétique 12 - Mutagénèse 13 - Transposition - recombinaison 14 - Construction de vecteurs 15 - Transgénèse
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traduction HTML V2.7
V. Morice
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Partie I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques
Chapitre 2 - Les polymérases | | |
2.6 - Fragment de Klenow
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| BG 07/1 |
- La digestion de la DNA polymérase I par une protéase (subtilisine) donne deux fragments : celui de 76 kD (fragment de Klenow) possède encore deux des activités catalytiques de la polymérase : 5’→3’ polymérase et 3’→5’ exonucléase. Ce fragment peut-être utilisé pour synthétiser le deuxième brin à partir d’un ADN simple brin et d’une amorce.
- La réaction est la même que celle de la DNA polymérase I. Les conditions de milieu et la vitesse de réaction sont les mêmes que celles de l’enzyme entière.
- Le fragment de Klenow est utilisé pour :
- la synthèse du deuxième brin, complémentaire d’un cDNA ;
- le marquage des extrémités 5’ sortantes du DNA double brin ;
- le marquage du DNA par la technique des amorces aléatoires ;
- le séquençage du DNA par la technique des didésoxynucléotides ;
- la mutagénèse dirigée à partir d’oligonucléotides synthétiques.
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