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Biologie génique

Plan du cours

Objectifs

I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques

1 - Phosphorylation - déphosphorylation

2 - Les polymérases

3 - Les ligases

4 - Les isomérases

5 - Les nucléases

6 - Autres enzymes

II - Préparation des acides nucléiques

7 - Extraction et purification

8 - Synthèse des polynucléotides

9 - Caractérisation des acides nucléiques

III - Caractérisation des événements génétiques

10 - Mutations

11 - Expression

IV - Le génie génétique

12 - Mutagénèse

13 - Transposition - recombinaison

14 - Construction de vecteurs

15 - Transgénèse


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traduction HTML V2.8
V. Morice


Partie I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques
Chapitre 2 - Les polymérases

 

2.6 - Fragment de Klenow

 

Image BG_07_1_PICT.jpg
BG 07/1

  • La digestion de la DNA polymérase I par une protéase (subtilisine) donne deux fragments : celui de 76 kD (fragment de Klenow) possède encore deux des activités catalytiques de la polymérase : 5’→3’ polymérase et 3’→5’ exonucléase. Ce fragment peut-être utilisé pour synthétiser le deuxième brin à partir d’un ADN simple brin et d’une amorce.
  • La réaction est la même que celle de la DNA polymérase I. Les conditions de milieu et la vitesse de réaction sont les mêmes que celles de l’enzyme entière.
  • Le fragment de Klenow est utilisé pour :
    • la synthèse du deuxième brin, complémentaire d’un cDNA ;
    • le marquage des extrémités 5’ sortantes du DNA double brin ;
    • le marquage du DNA par la technique des amorces aléatoires ;
    • le séquençage du DNA par la technique des didésoxynucléotides ;
    • la mutagénèse dirigée à partir d’oligonucléotides synthétiques.

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2.1 - DNA polymérase (réaction)
2.2 - DNA polymérase (exonucléase 3’→5’)
2.3 - DNA polymérase (fonction d’édition)
2.4 - DNA-polymérases (tableau)
2.5 - DNA pol I (E. Coli)
2.6 - Fragment de Klenow
2.7 - T4 DNA polymérase
2.8 - Sequenase
2.9 - Taq polymérase
2.10 - Reverse transcriptase
2.11 - RNA polymérase II (réaction)
2.12 - RNA polymérases (phages)
2.13 - Poly(A) polymérase