médecine
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Biologie génique

Plan du cours

Objectifs

I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques

1 - Phosphorylation - déphosphorylation

2 - Les polymérases

3 - Les ligases

4 - Les isomérases

5 - Les nucléases

6 - Autres enzymes

II - Préparation des acides nucléiques

7 - Extraction et purification

8 - Synthèse des polynucléotides

9 - Caractérisation des acides nucléiques

III - Caractérisation des événements génétiques

10 - Mutations

11 - Expression

IV - Le génie génétique

12 - Mutagénèse

13 - Transposition - recombinaison

14 - Construction de vecteurs

15 - Transgénèse


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traduction HTML V2.8
V. Morice


Partie IV - Le génie génétique
Chapitre 15 - Transgénèse

 

15.2 - Souris knock out

 

Image BG_99_PICT.jpg
BG 99

  • L’étude des fonctions engendrées par l’expression d’un gène peut se faire en supprimant le gène du patrimoine génétique d’un animal d’expérience. Une souris ainsi privée du gène de l’apolipoprotéine B est appelée souris knock-out pour le gène apoB (Li-Shin Huang : J.Clin.Invest. 1995; 96: 2152-61).
  • L’ADN visé pour supprimer l’expression de l’apoB est le début du gène de cette protéine, en particulier les quatre premiers exons qui sont compris dans un fragment EcoR I de 8,5 Kb.
  • On prépare un vecteur (pPNT modifié) qui comprend un promoteur, un gène reporter (thymidine kinase = TK) et un gène de résistance à la néomycine (Néor) et une partie du gène de l’apoB (jusqu’à l’exon 4). Ce vecteur est amplifié dans des cellules J1 ES, testée pour la présence de l’activité thymidine kinase et la résistance à la néomycine.
  • Des œufs fécondés de souris, au stade blastocyste (après 3,5 jours de développement) sont transfectés par le vecteur. L’ADN du vecteur partiellement homologue du gène de l’apoB, va se transposer à la place de ce gène sur une longueur de 5,5 Kb, pour donner un gène recombinant dans lequel le gène de résistance à la néomycine a remplacé les premiers exons du gène de l’apoB. Les œufs sont réimplantés dans un utérus de la mère et la gestation se poursuit.
  • Le gène apoB modifié ne sera plus exprimé et il en résultera une absence totale de lipoprotéines de basse densité chez les souris qui auront subi cette transposition.

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15.1 - Vecteurs de thérapie
15.2 - Souris knock out