Partie IV - Le génie génétique
Chapitre 15 - Transgénèse

15.2 - Souris knock out

BG 99

• L’étude des fonctions engendrées par l’expression d’un gène peut se faire en supprimant le gène du patrimoine génétique d’un animal d’expérience. Une souris ainsi privée du gène de l’apolipoprotéine B est appelée souris knock-out pour le gène apoB (Li-Shin Huang : J.Clin.Invest. 1995; 96: 2152-61).
• L’ADN visé pour supprimer l’expression de l’apoB est le début du gène de cette protéine, en particulier les quatre premiers exons qui sont compris dans un fragment EcoR I de 8,5 Kb.
• On prépare un vecteur (pPNT modifié) qui comprend un promoteur, un gène reporter (thymidine kinase = TK) et un gène de résistance à la néomycine (Néor) et une partie du gène de l’apoB (jusqu’à l’exon 4). Ce vecteur est amplifié dans des cellules J1 ES, testée pour la présence de l’activité thymidine kinase et la résistance à la néomycine.
• Des œufs fécondés de souris, au stade blastocyste (après 3,5 jours de développement) sont transfectés par le vecteur. L’ADN du vecteur partiellement homologue du gène de l’apoB, va se transposer à la place de ce gène sur une longueur de 5,5 Kb, pour donner un gène recombinant dans lequel le gène de résistance à la néomycine a remplacé les premiers exons du gène de l’apoB. Les œufs sont réimplantés dans un utérus de la mère et la gestation se poursuit.
• Le gène apoB modifié ne sera plus exprimé et il en résultera une absence totale de lipoprotéines de basse densité chez les souris qui auront subi cette transposition.