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Plan du cours Objectifs I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques 1 - Phosphorylation - déphosphorylation 2 - Les polymérases 3 - Les ligases 4 - Les isomérases 5 - Les nucléases 6 - Autres enzymes II - Préparation des acides nucléiques 7 - Extraction et purification 8 - Synthèse des polynucléotides 9 - Caractérisation des acides nucléiques III - Caractérisation des événements génétiques 10 - Mutations 11 - Expression IV - Le génie génétique 12 - Mutagénèse 13 - Transposition - recombinaison 14 - Construction de vecteurs 15 - Transgénèse
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traduction HTML V2.7
V. Morice
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Partie IV - Le génie génétique
Chapitre 12 - Mutagénèse | | |
12.1 - Création d’un site de restriction
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| BG 91 |
- Le polymorphisme des fragments de restriction est une des façons les plus simples de mettre en évidence une mutation dans l’ADN. Mais il arrive que la mutation ne modifie aucun des sites de restriction de l’ADN du gène. La mutation Arg3500→Gln de l’apolipoprotéine B en est un exemple.
- Pour permettre l’identification d’une telle mutation on va faire l’amplification grâce à des amorces modifiées pour créer un polymorphisme parmi les fragments de digestion de l’ADN amplifié.
- Pour amplifier le fragment de l’apoB on synthétise une amorce (côté 5’) complémentaire du brin antisens sauf pour l’extrémité 3’OH qui est ACCC au lieu de ACAC. Le misappariement entre le C de l’amorce et le T du brin antisens n’est pas suffisant pour empêcher l’hybridation et donc la PCR se fait à partir de cette amorce : ACCCGGTCTTCA... Il apparaît donc dans l’ADN amplifié un site CCGG reconnu par l’enzyme Msp I qui digérera l’ADN à cet endroit.
- Si l’amplification se fait à partir de l’ADN muté : ACCCAGTCTTCA... le site Msp I n’apparaît pas, il n’y a donc pas d’hydrolyse à cet endroit et le fragment digéré par Msp I est plus long que dans l’ADN normal.
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