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Biologie génique

Plan du cours

Objectifs

I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques

1 - Phosphorylation - déphosphorylation

2 - Les polymérases

3 - Les ligases

4 - Les isomérases

5 - Les nucléases

6 - Autres enzymes

II - Préparation des acides nucléiques

7 - Extraction et purification

8 - Synthèse des polynucléotides

9 - Caractérisation des acides nucléiques

III - Caractérisation des événements génétiques

10 - Mutations

11 - Expression

IV - Le génie génétique

12 - Mutagénèse

13 - Transposition - recombinaison

14 - Construction de vecteurs

15 - Transgénèse


Tous droits de reproduction réservés aux auteurs


traduction HTML V2.8
V. Morice


Partie IV - Le génie génétique
Chapitre 12 - Mutagénèse

 

12.2 - Mutagénèse par PCR

 

Image BG_92_PICT.jpg
BG 92

  • La création d’une mutation artificielle peut être obtenue dans un gène par le jeu des amplifications à partir d’amorces modifiées.
  • On prépare l’amplification du gène ou du cDNA grâce à deux amorces placées en amont et en aval de la séquence d’intérêt. On prépare aussi par synthèse des oligonucléotides conformes aux séquences des deux brins du gène autour du codon qui doit être modifié mais dont les bases sont volontairement changées pour qu’elles permettent la synthèse d’un brin complémentaire comprenant la substitution (ou la délétion...) souhaitée.
  • On fait une première amplification entre chacune des amorces modifiées et les amorces des extrémités. En réunissant ces deux amplifications et en dénaturant l’ADN, on conduit à une renaturation entre les fragments au niveau des amorces centrales modifiées. Cette hybridation fait apparaître des extrémités 3’OH d’où l’élongation (Taq polymérase) peut se poursuivre jusqu’aux extrémités de la séquence d’intérêt. La poursuite des cycles en présence des amorces amont et aval conduit à l’amplification de cette séquence complète dans laquelle le codon muté a été inséré.

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12.1 - Création d’un site de restriction
12.2 - Mutagénèse par PCR