médecine
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Biologie génique

Plan du cours

Objectifs

I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques

1 - Phosphorylation - déphosphorylation

2 - Les polymérases

3 - Les ligases

4 - Les isomérases

5 - Les nucléases

6 - Autres enzymes

II - Préparation des acides nucléiques

7 - Extraction et purification

8 - Synthèse des polynucléotides

9 - Caractérisation des acides nucléiques

III - Caractérisation des événements génétiques

10 - Mutations

11 - Expression

IV - Le génie génétique

12 - Mutagénèse

13 - Transposition - recombinaison

14 - Construction de vecteurs

15 - Transgénèse


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traduction HTML V2.8
V. Morice


Partie III - Caractérisation des événements génétiques
Chapitre 11 - Expression

 

11.9 - Clonage directionnel

 

Image BG_87_PICT.jpg
BG 87

  • L’insertion d’un fragment d’ADN dans un polylinker permet d’orienter le fragment par rapport au vecteur et d’obtenir par exemple le séquençage d’un fragement dans chaque sens.
  • Supposons un fragment d’ADN double brin digéré successivement par les enzymes Sal I et BamH I de telle façon que les extrémités soient cohésives (bouts collants de chacun de ces sites de restriction). On utilise pour faire le clonage une paire de vecteurs pourvu d’un polylinker dans un sens pour le vecteur 1 et en sens inverse pour le vecteur 2. Lors de la recombinaison le fragment d’ADN vient s’insérer dans un sens sur le vecteur 1 et dans l’autre sur le vecteur 2. Après la croissance bactérienne on dispose de colonies n’ayant un insert que dans un seul sens. Grâce à des amorces spécifiques de l’ADN du vecteur on peut alors séquencer le brin d’ADN spécifiquement dans le sens où il est inséré.
  • Cette technique est utilisée principalement pour effectuer le séquençage des gènes sur les deux brins, la séquence antiparallèle et complémentaire permettant de contrôler la séquence d’un premier brin.

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11.1 - Vecteur (définition)
11.2 - Cellules-hôtes
11.3 - Cycle du phage λ
11.4 - Phage λ
11.5 - Clonage (I)
11.6 - Clonage (II)
11.7 - EMBL
11.8 - Polylinker
11.9 - Clonage directionnel
11.10 - Carte du plasmide pBR322
11.11 - Carte des plasmides pUC18/19
11.12 - Cycle de M13
11.13 - Carte du M13