Partie III - Caractérisation des événements génétiques
Chapitre 11 - Expression

11.9 - Clonage directionnel

BG 87

• L’insertion d’un fragment d’ADN dans un polylinker permet d’orienter le fragment par rapport au vecteur et d’obtenir par exemple le séquençage d’un fragement dans chaque sens.
• Supposons un fragment d’ADN double brin digéré successivement par les enzymes Sal I et BamH I de telle façon que les extrémités soient cohésives (bouts collants de chacun de ces sites de restriction). On utilise pour faire le clonage une paire de vecteurs pourvu d’un polylinker dans un sens pour le vecteur 1 et en sens inverse pour le vecteur 2. Lors de la recombinaison le fragment d’ADN vient s’insérer dans un sens sur le vecteur 1 et dans l’autre sur le vecteur 2. Après la croissance bactérienne on dispose de colonies n’ayant un insert que dans un seul sens. Grâce à des amorces spécifiques de l’ADN du vecteur on peut alors séquencer le brin d’ADN spécifiquement dans le sens où il est inséré.
• Cette technique est utilisée principalement pour effectuer le séquençage des gènes sur les deux brins, la séquence antiparallèle et complémentaire permettant de contrôler la séquence d’un premier brin.