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Biologie génique

Plan du cours

Objectifs

I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques

1 - Phosphorylation - déphosphorylation

2 - Les polymérases

3 - Les ligases

4 - Les isomérases

5 - Les nucléases

6 - Autres enzymes

II - Préparation des acides nucléiques

7 - Extraction et purification

8 - Synthèse des polynucléotides

9 - Caractérisation des acides nucléiques

III - Caractérisation des événements génétiques

10 - Mutations

11 - Expression

IV - Le génie génétique

12 - Mutagénèse

13 - Transposition - recombinaison

14 - Construction de vecteurs

15 - Transgénèse


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traduction HTML V2.8
V. Morice


Partie III - Caractérisation des événements génétiques
Chapitre 11 - Expression

 

11.6 - Clonage (II)

 

Image BG_84_1_PICT.jpg
BG 84/1

  • On est alors en présence d’un ADN circulaire comportant à droite la séquence du plasmide dont le site Hind III a été refermé et une insertion comprenant un mRNA (en vert) entre la fin de l’oligo(dG) et la fin de la queue poly(A) et le DNA complémentaire (cDNA, en jaune) entre le début de l’oligo(dT) et la fin de l’oligo(dC).
  • L’ARN inséré est alors digéré par la RNase H, spécifique des hybrides RNA:DNA. Cette digestion crée une brèche qui sera comblée par une DNA polymérase et enfin fermée par la DNA ligase.
  • On obtient alors un plasmide fonctionnel d’ADN circulaire dans lequel est inséré un ADN double brin correspondant à la séquence du messager. Ce plasmide est utilisé pour transfecter une souche compétente de bactéries-hôtes auxquelles il confère un gène de résistance à l’ampicilline.
  • La culture de cette bactérie, en présence de l’antibiotique, permet de récupérer une grande quantité de cet ADN circulaire qui peut être utilisé ensuite pour caractériser, séquencer ou exprimer la séquence clonée du messager de départ.

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11.1 - Vecteur (définition)
11.2 - Cellules-hôtes
11.3 - Cycle du phage λ
11.4 - Phage λ
11.5 - Clonage (I)
11.6 - Clonage (II)
11.7 - EMBL
11.8 - Polylinker
11.9 - Clonage directionnel
11.10 - Carte du plasmide pBR322
11.11 - Carte des plasmides pUC18/19
11.12 - Cycle de M13
11.13 - Carte du M13