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Biologie génique

Plan du cours

Objectifs

I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques

1 - Phosphorylation - déphosphorylation

2 - Les polymérases

3 - Les ligases

4 - Les isomérases

5 - Les nucléases

6 - Autres enzymes

II - Préparation des acides nucléiques

7 - Extraction et purification

8 - Synthèse des polynucléotides

9 - Caractérisation des acides nucléiques

III - Caractérisation des événements génétiques

10 - Mutations

11 - Expression

IV - Le génie génétique

12 - Mutagénèse

13 - Transposition - recombinaison

14 - Construction de vecteurs

15 - Transgénèse


Tous droits de reproduction réservés aux auteurs


traduction HTML V2.8
V. Morice


Partie III - Caractérisation des événements génétiques
Chapitre 11 - Expression

 

11.5 - Clonage (I)

 

Image BG_84_PICT.jpg
BG 84

  • Un plasmide est utilisé pour insérer un ARN messager spécifique. Une extrémité à bouts francs a été prolongée par une queue poly(dT) grâce à la terminal transférase. Cet oligo(dT) en s’hybridant avec la queue poly(A) du messager, fournit un site d’initiation à une DNA polymérase pour synthétiser un cDNA complémentaire du messager initial. A l’extrémité 3’OH de ce fragment, une nouvelle queue poly(dC) est encore ajoutée par une terminal transférase. Le montage est alors digéré par Hind III qui hydrolyse un site à l’autre extrémité du plasmide (digestion).
  • On prépare aussi un chaînon de ligation pourvu d’une queue poly(dG) par la terminal transférase et digéré de l’autre côté par Hind III. En incubant ensemble ces deux fragments d’ADN on forme un ADN circulaire (annéalisation) par hybridation des deux extrémités Hind III et des queues oligo(dC) et oligo (dG).
  • L’ADN circulaire ainsi obtenu sera enfin incubé avec la DNA ligase pour fermer les deux brèches du site Hind III et la liaison entre l’extrémité 3’ de la queue poly(dC) et le chaînon intermédiaire (ligation).

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11.1 - Vecteur (définition)
11.2 - Cellules-hôtes
11.3 - Cycle du phage λ
11.4 - Phage λ
11.5 - Clonage (I)
11.6 - Clonage (II)
11.7 - EMBL
11.8 - Polylinker
11.9 - Clonage directionnel
11.10 - Carte du plasmide pBR322
11.11 - Carte des plasmides pUC18/19
11.12 - Cycle de M13
11.13 - Carte du M13