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Biologie génique

Plan du cours

Objectifs

I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques

1 - Phosphorylation - déphosphorylation

2 - Les polymérases

3 - Les ligases

4 - Les isomérases

5 - Les nucléases

6 - Autres enzymes

II - Préparation des acides nucléiques

7 - Extraction et purification

8 - Synthèse des polynucléotides

9 - Caractérisation des acides nucléiques

III - Caractérisation des événements génétiques

10 - Mutations

11 - Expression

IV - Le génie génétique

12 - Mutagénèse

13 - Transposition - recombinaison

14 - Construction de vecteurs

15 - Transgénèse


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traduction HTML V2.8
V. Morice


Partie III - Caractérisation des événements génétiques
Chapitre 11 - Expression

 

11.2 - Cellules-hôtes

 

Image BG_81_PICT.jpg
BG 81

  • Les cellules qui sont habituellement transfectées par des vecteurs contenant des fragments d’ADN, sont destinées à permettre d’amplifier ce vecteur en même temps que leur croissance.
  • Des bactéries comme Escherichia coli sont utilisées pour recevoir des plasmides. Certaines souches de cette espèce sont plus particulièrement développées pour permettre la transfection de certain vecteurs : souche DH5α pour les plasmides pUC18 ou pUC19, HB 101 pour le plasmide pBR322, souche JM 109 dépourvue d’opéron lactose pour les vecteurs à β-galactosidase.
  • Des levures comme Saccharomyces cerevisiae (levure de bière) ou Pichia pastoris sont utilisées pour des vecteurs eucaryotiques, ainsi que des végétaux : Spodoptera frugiperda ou Trichoplusiani.
  • Les cellules animales en culture du hamster doré : CHO (Chinese hamster ovaries) ou BHK (baby hamster kidneys) ou de la souris : lignée 3T3 peuvent recevoir des vecteurs spécifiques. Certaines lignées de cellules humaines en culture (cellules HeLa) peuvent aussi être employées.
  • Certains vecteurs sont employés pour exprimer des gènes commandés par des promoteurs spécifiques : promoteur des métallothionéïnes, répondant à la présence de métaux lourds (Cd par exemple) ou promoteur induit par l’ecdysone (hormone stéroïde des Insectes).

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11.1 - Vecteur (définition)
11.2 - Cellules-hôtes
11.3 - Cycle du phage λ
11.4 - Phage λ
11.5 - Clonage (I)
11.6 - Clonage (II)
11.7 - EMBL
11.8 - Polylinker
11.9 - Clonage directionnel
11.10 - Carte du plasmide pBR322
11.11 - Carte des plasmides pUC18/19
11.12 - Cycle de M13
11.13 - Carte du M13