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Plan du cours Objectifs I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques 1 - Phosphorylation - déphosphorylation 2 - Les polymérases 3 - Les ligases 4 - Les isomérases 5 - Les nucléases 6 - Autres enzymes II - Préparation des acides nucléiques 7 - Extraction et purification 8 - Synthèse des polynucléotides 9 - Caractérisation des acides nucléiques III - Caractérisation des événements génétiques 10 - Mutations 11 - Expression IV - Le génie génétique 12 - Mutagénèse 13 - Transposition - recombinaison 14 - Construction de vecteurs 15 - Transgénèse
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traduction HTML V2.7
V. Morice
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Partie III - Caractérisation des événements génétiques
Chapitre 11 - Expression | | |
11.13 - Carte du M13
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| BG 90/1 |
- Le bactériophage M13 est constitué d’un ADN simple brin. On a construit des vecteurs en introduisant dans la séquence une forme tronquée du gène de la β-galactosidase d’Escherichia coli (gène LacZ’). L’ensemble a une longueur de 7249 paires de bases (pb).
- Le gène lacZ’ code pour la partie NH2 terminale du gène de la β-galactosidase. Cette séquence (peptide de complémentation) est indispensable pour que la bactérie hôte puisse faire la réaction de cette enzyme (phénomène d’α-complémentation, voir BG 44 section 6.1).
- Les codons 5 à 18 de ce gène lacZ’ forment dans M13mp18 un ensemble de séquences spécifiques d’enzymes de restriction (sites de restrictions dans l’ADN double brin) qu’on nomme polylinker ou site de clonage multiple. Dans M13mp19 les mêmes sites de restriction se trouvent dans l’ordre inverse.
- Le polylinker, hydrolysé par une des enzymes de restriction, peut recevoir une séquence d’ADN liée par recombinaison. Dans ce cas, l’expression du peptide complémentaire de la β-galactosidase est interrompue et la bactérie ne pourra plus digérer le X-Gal, ce qui l’empêchera de prendre la couleur bleue caractéristique. Les colonies résistantes à l’ampicilline et de couleur blanche sont donc transfectées par le vecteur recombinant.
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