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Biologie génique

Plan du cours

Objectifs

I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques

1 - Phosphorylation - déphosphorylation

2 - Les polymérases

3 - Les ligases

4 - Les isomérases

5 - Les nucléases

6 - Autres enzymes

II - Préparation des acides nucléiques

7 - Extraction et purification

8 - Synthèse des polynucléotides

9 - Caractérisation des acides nucléiques

III - Caractérisation des événements génétiques

10 - Mutations

11 - Expression

IV - Le génie génétique

12 - Mutagénèse

13 - Transposition - recombinaison

14 - Construction de vecteurs

15 - Transgénèse


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traduction HTML V2.8
V. Morice


Partie III - Caractérisation des événements génétiques
Chapitre 11 - Expression

 

11.13 - Carte du M13

 

Image BG_90_1_PICT.jpg
BG 90/1

  • Le bactériophage M13 est constitué d’un ADN simple brin. On a construit des vecteurs en introduisant dans la séquence une forme tronquée du gène de la β-galactosidase d’Escherichia coli (gène LacZ’). L’ensemble a une longueur de 7249 paires de bases (pb).
  • Le gène lacZ’ code pour la partie NH2 terminale du gène de la β-galactosidase. Cette séquence (peptide de complémentation) est indispensable pour que la bactérie hôte puisse faire la réaction de cette enzyme (phénomène d’α-complémentation, voir BG 44 section 6.1).
  • Les codons 5 à 18 de ce gène lacZ’ forment dans M13mp18 un ensemble de séquences spécifiques d’enzymes de restriction (sites de restrictions dans l’ADN double brin) qu’on nomme polylinker ou site de clonage multiple. Dans M13mp19 les mêmes sites de restriction se trouvent dans l’ordre inverse.
  • Le polylinker, hydrolysé par une des enzymes de restriction, peut recevoir une séquence d’ADN liée par recombinaison. Dans ce cas, l’expression du peptide complémentaire de la β-galactosidase est interrompue et la bactérie ne pourra plus digérer le X-Gal, ce qui l’empêchera de prendre la couleur bleue caractéristique. Les colonies résistantes à l’ampicilline et de couleur blanche sont donc transfectées par le vecteur recombinant.

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11.1 - Vecteur (définition)
11.2 - Cellules-hôtes
11.3 - Cycle du phage λ
11.4 - Phage λ
11.5 - Clonage (I)
11.6 - Clonage (II)
11.7 - EMBL
11.8 - Polylinker
11.9 - Clonage directionnel
11.10 - Carte du plasmide pBR322
11.11 - Carte des plasmides pUC18/19
11.12 - Cycle de M13
11.13 - Carte du M13