médecine
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Biologie génique

Plan du cours

Objectifs

I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques

1 - Phosphorylation - déphosphorylation

2 - Les polymérases

3 - Les ligases

4 - Les isomérases

5 - Les nucléases

6 - Autres enzymes

II - Préparation des acides nucléiques

7 - Extraction et purification

8 - Synthèse des polynucléotides

9 - Caractérisation des acides nucléiques

III - Caractérisation des événements génétiques

10 - Mutations

11 - Expression

IV - Le génie génétique

12 - Mutagénèse

13 - Transposition - recombinaison

14 - Construction de vecteurs

15 - Transgénèse


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traduction HTML V2.8
V. Morice


Partie III - Caractérisation des événements génétiques
Chapitre 11 - Expression

 

11.11 - Carte des plasmides pUC18/19

 

Image BG_89_PICT.jpg
BG 89

  • Les plasmides pUC18 et pUC19 sont des ADN circulaires double brin de 2696 paires de bases (pb). Ils ont été construits par recombinaison d’un fragment de pBR322 (2250 pb) et d’un fragment de M13 double brin (446 pb) : M13mp18 pour pUC18 et M13mp19 pour pUC19.
  • L’ADN issu de pBR322 contient le gène ampr qui permet la sélection par la résistance à l’ampicilline. L’ADN issu de M13 contient le promoteur du gène lacZ suivi d’une séquence modifiée comprenant un polylinker (voir BG 86, section 11.8) et la séquence de la partie NH2 terminale du gène de la β-galactosidase. Cette séquence est indispensable pour que la bactérie hôte puisse faire la réaction de cette enzyme (phénomène d’α-complémentation, voir BG 44 section 6.1).
  • Le polylinker, hydrolysé par une des enzymes de restriction, peut recevoir une séquence d’ADN liée par recombinaison. Dans ce cas, l’expression du peptide complémentaire de la β-galactosidase est interrompue et la bactérie ne pourra plus digérer le X-Gal, ce qui l’empêchera de prendre la couleur bleue caractéristique. Les colonies résistantes à l’ampicilline et de couleur blanche sont donc transfectées par le vecteur recombinant.

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11.1 - Vecteur (définition)
11.2 - Cellules-hôtes
11.3 - Cycle du phage λ
11.4 - Phage λ
11.5 - Clonage (I)
11.6 - Clonage (II)
11.7 - EMBL
11.8 - Polylinker
11.9 - Clonage directionnel
11.10 - Carte du plasmide pBR322
11.11 - Carte des plasmides pUC18/19
11.12 - Cycle de M13
11.13 - Carte du M13