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Biologie génique

Plan du cours

Objectifs

I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques

1 - Phosphorylation - déphosphorylation

2 - Les polymérases

3 - Les ligases

4 - Les isomérases

5 - Les nucléases

6 - Autres enzymes

II - Préparation des acides nucléiques

7 - Extraction et purification

8 - Synthèse des polynucléotides

9 - Caractérisation des acides nucléiques

III - Caractérisation des événements génétiques

10 - Mutations

11 - Expression

IV - Le génie génétique

12 - Mutagénèse

13 - Transposition - recombinaison

14 - Construction de vecteurs

15 - Transgénèse


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traduction HTML V2.8
V. Morice


Partie III - Caractérisation des événements génétiques
Chapitre 10 - Mutations

 

10.1 - Polymorphismes de restriction

 

Image BG_78_PICT.jpg
BG 78

  • Les polymorphismes de longueur des fragments de restriction (Restriction Length Fragment Polymorphism = RFLP) sont des techniques simples pour analyser la séquence des acides nucléiques.
  • Dans une séquence amplifiée par PCR à partir du gène du récepteur des LDL, comme celle (148 pb) représentée ci-dessus, on trouve des sites de restriction : par exemple Hae III (gg/cc).
  • En digérant les amplicons par cette enzyme on peut distinguer les ADN ayant ce site (à l’électrophorèse deux fragments : 35 et 113 pb) de ceux ayant une séquence différente au niveau de ces quatre nucléotides (pas de coupure, un seul fragment de 148 pb). Si le prélèvement provient d’ADN génomique, les séquences amplifiées à partir des deux chromosomes homologues peuvent être différentes (hétérozygotie avec trois fragments : 35, 113 et 148 pb).
  • Les polymorphismes sont fréquents dans la population : pour celui-ci il y a 77 % qui ont ce site Hae III (séquence « sauvage ») et 23 % qui ne l’ont pas.
  • On peut aussi rechercher par cette technique des mutations, par définition beaucoup plus rares que ces polymorphismes.

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10.1 - Polymorphismes de restriction
10.2 - Polymorphisme Msp I de l’apoA-II
10.3 - Haplotypes
10.4 - Cartes de restriction