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Plan du cours Objectifs I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques 1 - Phosphorylation - déphosphorylation 2 - Les polymérases 3 - Les ligases 4 - Les isomérases 5 - Les nucléases 6 - Autres enzymes II - Préparation des acides nucléiques 7 - Extraction et purification 8 - Synthèse des polynucléotides 9 - Caractérisation des acides nucléiques III - Caractérisation des événements génétiques 10 - Mutations 11 - Expression IV - Le génie génétique 12 - Mutagénèse 13 - Transposition - recombinaison 14 - Construction de vecteurs 15 - Transgénèse
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traduction HTML V2.7
V. Morice
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Partie III - Caractérisation des événements génétiques
Chapitre 10 - Mutations | | |
10.1 - Polymorphismes de restriction
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| BG 78 |
- Les polymorphismes de longueur des fragments de restriction (Restriction Length Fragment Polymorphism = RFLP) sont des techniques simples pour analyser la séquence des acides nucléiques.
- Dans une séquence amplifiée par PCR à partir du gène du récepteur des LDL, comme celle (148 pb) représentée ci-dessus, on trouve des sites de restriction : par exemple Hae III (gg/cc).
- En digérant les amplicons par cette enzyme on peut distinguer les ADN ayant ce site (à l’électrophorèse deux fragments : 35 et 113 pb) de ceux ayant une séquence différente au niveau de ces quatre nucléotides (pas de coupure, un seul fragment de 148 pb). Si le prélèvement provient d’ADN génomique, les séquences amplifiées à partir des deux chromosomes homologues peuvent être différentes (hétérozygotie avec trois fragments : 35, 113 et 148 pb).
- Les polymorphismes sont fréquents dans la population : pour celui-ci il y a 77 % qui ont ce site Hae III (séquence « sauvage ») et 23 % qui ne l’ont pas.
- On peut aussi rechercher par cette technique des mutations, par définition beaucoup plus rares que ces polymorphismes.
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