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Biologie génique

Plan du cours

Objectifs

I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques

1 - Phosphorylation - déphosphorylation

2 - Les polymérases

3 - Les ligases

4 - Les isomérases

5 - Les nucléases

6 - Autres enzymes

II - Préparation des acides nucléiques

7 - Extraction et purification

8 - Synthèse des polynucléotides

9 - Caractérisation des acides nucléiques

III - Caractérisation des événements génétiques

10 - Mutations

11 - Expression

IV - Le génie génétique

12 - Mutagénèse

13 - Transposition - recombinaison

14 - Construction de vecteurs

15 - Transgénèse


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traduction HTML V2.8
V. Morice


Partie III - Caractérisation des événements génétiques
Chapitre 10 - Mutations

 

10.2 - Polymorphisme Msp I de l’apoA-II

 

Image BG_78_1_PICT.jpg
BG 78/1

  • Le Southern blot permet la détection des polymorphismes de longueur des fragments de restriction (RFLP ou restriction fragments length polymorphism).
  • Il existe un polymorphisme dans le gène de l’apolipoprotéine A-II. Ce polymorphisme altère la séquence du site reconnu par l’enzyme de restriction Msp I situé en aval du gène, de telle sorte que 19 % des sujets (anglais) ne présente pas de site de restriction à cet endroit.
  • Lorsqu’on digère l’ADN génomique de plusieurs individus choisis au hasard on obtient des fragments de taille différentes entre chaque point de coupure par l’enzyme. Après électrophorèse pour séparer ces fragments en fonction de leur taille et transfert sur une membrane, on hybride les fragments sur la membrane avec une sonde complémentaire des exons de l’apoA-II puis on fait l’autoradiograhie de la membrane pour révéler ces fragments.
  • La plupart de ces sujets (81 %) qui possèdent trois sites de coupure autour du gène donnent un fragment de 3000 paires de nucléotides (3,0 kb).
  • D’autres sujets, plus rares (19 %) qui ne possèdent pas le site de restriction ont un fragment plus grand = 3700 paires de nucléotides (3,7 kb). Le sujet dont l’ADN a été déposé dans l’électrophorèse au n°3 est dans ce cas.
  • Il arrive qu’un sujet porte un allèle du type fréquent sur un chromosome et l’autre allèle sur l’autre chromosome. Il est alors hétérozygote pour le polymorphisme et à l’électrophorèse (n°4) on voit les deux fragments révélés par la sonde.

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10.1 - Polymorphismes de restriction
10.2 - Polymorphisme Msp I de l’apoA-II
10.3 - Haplotypes
10.4 - Cartes de restriction