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Biologie génique

Plan du cours

Objectifs

I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques

1 - Phosphorylation - déphosphorylation

2 - Les polymérases

3 - Les ligases

4 - Les isomérases

5 - Les nucléases

6 - Autres enzymes

II - Préparation des acides nucléiques

7 - Extraction et purification

8 - Synthèse des polynucléotides

9 - Caractérisation des acides nucléiques

III - Caractérisation des événements génétiques

10 - Mutations

11 - Expression

IV - Le génie génétique

12 - Mutagénèse

13 - Transposition - recombinaison

14 - Construction de vecteurs

15 - Transgénèse


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traduction HTML V2.8
V. Morice


Partie I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques
Chapitre 1 - Phosphorylation - déphosphorylation

 

1.4 - Phosphatase alcaline

 

Image BG_04_PICT.jpg
BG 04

  • Les phosphatases sont des enzymes à très large spécificité, hydrolysant le radical phosphoryle porté par une liaison ester ou anhydride... On les divise en plusieurs classes en fonction de leur pH optimum d’action : phosphatases acides, phosphatases alcalines. Certaines phosphatases ont une spécificité de substrat plus étroite : 5’ nucléotidase. La réaction catalysée par les phosphatases est irréversible, mais certaines sont capables d’échanger le radical phosphate à partir de molécules plus riches en énergie comme le pyrophosphate.
  • La phosphatase alcaline du commerce est celle extraite de l’intestin de veau. Une unité d’enzyme catalyse l’hydrolyse d’une micromole de paranitrophénylphosphate par minute à 37 °C.
  • La phosphatase alcaline est utilisée au laboratoire pour déphosphoryler les extrémités 5’ des acides nucléiques, soit pour préparer un marquage en 5’ par une polynucléotide kinase, soit pour empêcher la réannéalisation d’un ADN circulaire linéarisé (vecteurs de clonage).

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1.1 - Polynucléotide-kinase
1.2 - Polynucléotide kinase T4
1.3 - Terminal transferase
1.4 - Phosphatase alcaline