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Biologie génique

Plan du cours

Objectifs

I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques

1 - Phosphorylation - déphosphorylation

2 - Les polymérases

3 - Les ligases

4 - Les isomérases

5 - Les nucléases

6 - Autres enzymes

II - Préparation des acides nucléiques

7 - Extraction et purification

8 - Synthèse des polynucléotides

9 - Caractérisation des acides nucléiques

III - Caractérisation des événements génétiques

10 - Mutations

11 - Expression

IV - Le génie génétique

12 - Mutagénèse

13 - Transposition - recombinaison

14 - Construction de vecteurs

15 - Transgénèse


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traduction HTML V2.8
V. Morice


Partie I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques
Chapitre 1 - Phosphorylation - déphosphorylation

 

1.3 - Terminal transferase

 

Image BG_03_PICT.jpg
BG 03

  • La transférase terminale catalyse l’addition de désoxynucléotides sur une fonction alcool 3’OH terminale de l’ADN. L’enzyme préfère les molécules d’ADN dont l’extrémité 3’OH est sortante, mais il existe des conditions qui favorisent la catalyse sur l’ADN à bouts francs, voire sur les extrémités 3’OH rentrantes. Elle incorpore plus spécifiquement les purines ou les pyrimidines en fonction du cation divalent qu’on lui donne comme cofacteur : Mg++ pour les purines, Co++ pour les pyrimidines ou encore Mn++.
  • La transférase terminale du commerce est extraite du thymus de veau. Une unité d’enzyme catalyse le transfert de 17 picomoles de désoxyribonucléotide par minute à 37° C.
  • La transférase terminale est utilisée au laboratoire pour :
    • construire des séquences polymérisées de nucléotides (queues) à l’extrémité 3’OH de l’ADN (en vue du clonage des fragments d’ADN) ;
    • marquer les extrémités 3’ de l’ADN avec un nucléotide marqué sur le phosphate α ;
    • ajouter un nucléotide à la fin d’une séquence pour induire une mutation (mutagénèse dirigée).

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1.1 - Polynucléotide-kinase
1.2 - Polynucléotide kinase T4
1.3 - Terminal transferase
1.4 - Phosphatase alcaline