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Plan du cours Objectifs I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques 1 - Phosphorylation - déphosphorylation 2 - Les polymérases 3 - Les ligases 4 - Les isomérases 5 - Les nucléases 6 - Autres enzymes II - Préparation des acides nucléiques 7 - Extraction et purification 8 - Synthèse des polynucléotides 9 - Caractérisation des acides nucléiques III - Caractérisation des événements génétiques 10 - Mutations 11 - Expression IV - Le génie génétique 12 - Mutagénèse 13 - Transposition - recombinaison 14 - Construction de vecteurs 15 - Transgénèse
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traduction HTML V2.7
V. Morice
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Partie I - Enzymes agissant sur les acides nucléiques
Chapitre 1 - Phosphorylation - déphosphorylation | | |
1.3 - Terminal transferase
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| BG 03 |
- La transférase terminale catalyse l’addition de désoxynucléotides sur une fonction alcool 3’OH terminale de l’ADN. L’enzyme préfère les molécules d’ADN dont l’extrémité 3’OH est sortante, mais il existe des conditions qui favorisent la catalyse sur l’ADN à bouts francs, voire sur les extrémités 3’OH rentrantes. Elle incorpore plus spécifiquement les purines ou les pyrimidines en fonction du cation divalent qu’on lui donne comme cofacteur : Mg++ pour les purines, Co++ pour les pyrimidines ou encore Mn++.
- La transférase terminale du commerce est extraite du thymus de veau. Une unité d’enzyme catalyse le transfert de 17 picomoles de désoxyribonucléotide par minute à 37° C.
- La transférase terminale est utilisée au laboratoire pour :
- construire des séquences polymérisées de nucléotides (queues) à l’extrémité 3’OH de l’ADN (en vue du clonage des fragments d’ADN) ;
- marquer les extrémités 3’ de l’ADN avec un nucléotide marqué sur le phosphate α ;
- ajouter un nucléotide à la fin d’une séquence pour induire une mutation (mutagénèse dirigée).
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